Todo el resultado de un estudio de bioequivalencia descansa en una sola medida: la concentración del ingrediente activo en la sangre. No importa cuán bien esté diseñado el estudio, si esta medición no es fiable, el resultado obtenido tampoco es fiable. En los artículos anteriores de esta serie abordamos el diseño de estudio, variabilidad y el marco regulatorio. En este artículo final examinamos la validación del método bioanalítico, que se encuentra en la base silenciosa de todo el proceso, y la técnica LC-MS/MS con la que estas mediciones se hacen predominantemente hoy.
¿Qué es un método bioanalítico?
Un método bioanalítico es el método analítico que mide la concentración de un ingrediente activo en una muestra biológica. En un estudio de bioequivalencia, las muestras de sangre tomadas de los participantes en intervalos de tiempo definidos se miden uno por uno con este método. Cada medición forma un punto en la curva de tiempo de concentración descrita en los artículos anteriores. Por lo tanto, el método es la fuente de todos los datos que el estudio produce.
Un método que este decisivo debe demostrar ser fiable. Este proceso de prueba se denomina validación de método y se define por una directriz común a escala internacional1. Esta directriz establece en qué condiciones se debe considerar un método fiable y cuáles de sus características deben ser probadas.
¿Por qué LC-MS/MS?
Las concentraciones de un ingrediente activo en la sangre son a menudo extremadamente bajas, y la muestra es un ambiente complejo que contiene miles de otros componentes. Para medir con precisión en un entorno así, se necesitan tanto alta sensibilidad como alta selectividad.
LC-MS/MS reúne estos dos requisitos. La cromatografía líquida separa los componentes de la mezcla entre sí; la espectrometría de masa tándem reconoce y mide la molécula de destino según su masa. Esta combinación permite medir incluso concentraciones muy bajas fiables, distinguiéndolas de las otras sustancias de la muestra. Por esta razón el método preferido en estudios modernos de bioequivalencia es en gran parte este.
Los parámetros básicos de validación
Validar un método significa probarlo desde varios ángulos.2 Cada una de estas pruebas asegura una dimensión particular de la fiabilidad de la medición.
La selectividad muestra que el método puede distinguir la sustancia objetivo de los otros componentes de la muestra. La curva de calibración define la relación entre la señal medida y la concentración real y permite calcular la concentración de muestras desconocidas. La precisión describe cuán cerca está el valor medido al verdadero valor; la precisión describe cuán cercanas son las mediciones repetidas entre sí.
El límite inferior de cuantificación define la concentración más baja que el método puede medir de forma fiable; en estudios donde las concentraciones bajas importan, este límite es decisivo. La recuperación muestra hasta qué punto se puede recuperar la sustancia de la muestra. Revisa si una muestra afecta a la siguiente. Estabilidad confirma que la sustancia permanece intacta en la muestra bajo condiciones de almacenamiento y procesamiento.
Efecto de la matriz
Entre estos parámetros hay uno de especial importancia para los métodos basados en la espectrometría de masas: el efecto de matriz. Otros componentes de la muestra biológica pueden mejorar o suprimir la señal de medición de la sustancia objetivo. Si este efecto no se tiene en cuenta, la medición puede dar resultados sistemáticamente incorrectos. Por esta razón, la evaluación del efecto matriz es un paso separado y crítico en la validación de los métodos LC-MS/MS.
Análisis de muestras de estudio
La validación no es sólo una prueba realizada en la etapa de configuración del método. También se debe demostrar que el método mantiene su fiabilidad mientras se analizan las muestras de estudio. Para ello, algunas muestras se miden de nuevo en un momento diferente y se verifican para la consistencia con el primer resultado. Este cheque confirma que la medición es fiable no sólo en condiciones ideales sino también dentro del flujo real del estudio.
Un marco internacional único
En el pasado, diferentes regiones tenían directrices separadas para la validación del método bioanalítico23. Estas directrices se utilizaron en paralelo durante mucho tiempo. La directriz internacional común preparado posteriormente reunió estos enfoques en un marco único y hoy se ha convertido en el estándar común adoptado por las principales autoridades1. Türkiye también toma principios aceptados internacionalmente como su base en este campo; de esta manera, los datos producidos en un centro turco hablan el mismo idioma a escala internacional.
El papel de NanoTox
A lo largo de esta serie, una frase se repite: incluso el estudio mejor diseñado pierde su significado si la medición no es confiable. La validación del método bioanalítico es precisamente el paso que proporciona esta fiabilidad. Como centro autorizado para realizar estos estudios, NanoTox utiliza su infraestructura LC-MS/MS con métodos validados de acuerdo con directrices internacionales. La medición precisa, selectiva y reproducible incluso a bajas concentraciones es, para nosotros, no un objetivo sino una condición previa del estudio. La robustez científica detrás de un resultado de bioequivalencia nace exactamente de esta fundación.
Referencias
1 ICH M10. Bioanalytical Method Validation and Study Sample Analysis (Step 4, 24.05.2022). https://database.ich.org/sites/default/files/M10 Guideline Step4 2022 0524.pdf
2 U.S. Food and Drug Administration. Validación del método bioanalítico — Orientación para la industria (mayo de 2018). https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry
3 Agencia Europea de Medicinas. Directriz sobre validación del método bioanalítico (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009 Rev. 1). https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/guideline-bioanalytical-method-validation en.pdf
