整个结果... 生物等同性研究 以单一计量为基础:活性成分在血液中的浓度。 无论研究的设计如何良好,如果这种测量不可靠,所获得的结果也不可靠。 在该系列的前几篇文章中,我们讨论了研究设计、可变性和监管框架。 在最后一篇文章中,我们研究了生物分析方法验证,这是整个过程的沉默基础,以及这些测量方法今天主要采用的LC-MS/MS技术。
生物分析方法是什么?
生物分析方法 是测量生物样品活性成分浓度的分析方法。 在生物等同性研究中,在规定的时间间隔内取自参与者的血样用这种方法逐一测量. 每项测量在前几篇文章所描述的浓度-时间曲线上形成一分. 因此,该方法是研究产生的所有数据的来源。
这种决定性的方法必须证明是可靠的。 这种证明过程称为方法验证,由国际规模的共同准则界定。 这一准则规定了一种方法在什么条件下被认为是可靠的,必须测试其哪些特点。
为什么是LC-MS/MS?
血液中活性成分的浓度往往极低,样本是一个包含上千个其他成分的复杂环境. 为了在这种环境下准确衡量,需要高度敏感性和高度选择性。
LC-MS/MS将这两项要求结合在一起. 液相色谱法将混合物的成分相分离;并发质谱法然后根据目标分子的质量识别并测量. 这种结合使得能够可靠地测量甚至非常低的浓度,将它们与样品中的其他物质区分开来. 因此,现代生物等同性研究中偏好的方法主要是这个方法.
核心验证参数
验证一种方法意味着从几个角度对其进行测试。 每一项试验都保证了测量可靠性的特定方面。
选择性表明,该方法可以将目标物质与样本中的其他成分区分开来. 校正曲线定义了所测量的信号与实际浓度之间的关系,并允许计算出未知样本的浓度. 精确度描述所测量值与真实值的相近程度;精确度描述相邻的重复测量.
量化的下限定义了该方法能够可靠地测量的最低浓度;在低浓度重要的研究中,这一限值是决定性的. 回收表明可从样品中取出该物质的程度。 结转检查一个样本是否影响下一个样本. 稳定性证实,在储存和加工条件下,该物质在样品中保持不变。
矩阵效应
在这些参数中,有一个对基于质谱法的方法特别重要:矩阵效应. 生物样本中的其他成分可能增强或抑制目标物质的测量信号. 如果不考虑到这一影响,衡量结果可能会产生系统性错误。 因此,对矩阵效应的评价是验证LC-MS/MS方法的一个单独的关键步骤.
研究样本分析
验证不仅是在方法设置阶段进行的测试. 在分析实际研究样本时,还必须证明该方法的可靠性。 为此,一些样本在不同的时间再次被测量,并检查是否符合第一个结果. 这一检查证实,不仅在理想条件下,而且在研究的实际流量内,测量是可靠的。
单一国际框架
过去,不同区域有单独的生物分析方法验证准则。 这些准则长期平行使用。 共同国际准则 后来拟订的这些办法在一个单一的框架内汇集在一起,今天已成为主要当局采用的共同标准。 蒂尔基耶也以国际公认的原则作为这一领域的基础;这样,土耳其中心制作的数据在国际范围内使用同样的语言。
纳诺托克的作用
在整个系列中,有一句话重复:即使设计最好的研究,如果测量不可靠,也会失去其意义. 生物分析方法验证正是提供这种可靠性的步骤. 作为授权进行这些研究的中心,NanoTox使用其LC-MS/MS基础设施,其方法根据国际准则得到验证。 精确、有选择性和可复制的测量,即使在低浓度的情况下,对我们来说,并不是研究的目标,而是研究的先决条件。 生物等效结果背后的科学坚固性正是从这个基础诞生的.
参考资料
1 ICH M10. 生物分析方法验证和研究样品分析(第4期,24.05.2022. https://database.ich.org/sites/default/files/M10 Guideline Step4 2022 0524.pdf 互联网档案馆的存檔,存档日期2014-12-11.
2 美国食品药品管理局. 生物分析方法验证 — 行业指导 (2018年5月). https://www.fda.gov/regular-information/search-fda-指向-documents/bianalytical-method-validation-指向-工业
3 欧洲医药局。 关于生物分析方法验证的准则(EMEA/CHMP/EWP/192217/2009Rev.1)。 https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/guideline-bioanalytical-method-validation en.pdf 互联网档案馆的存檔,存档日期2014-12-21.
