النتيجة الكاملة دراسة التكافؤ البيولوجي يعتمد على قياس واحد: تركيز المكون النشط في الدم. وبغض النظر عن مدى تصميم الدراسة، إذا لم يكن هذا القياس موثوقا به، فإن النتيجة التي تم الحصول عليها ليست موثوقة أيضا. وفي المواد السابقة من هذه السلسلة، تناولنا تصميم الدراسة، والتباين، والإطار التنظيمي. وفي هذه المادة الأخيرة، ندرس التحقق من صحة الطريقة التحليلية الأحيائية، التي تشكل الأساس الصامت للعملية برمتها، وتقنية LC-MS/MS التي تجري بها هذه القياسات في الغالب اليوم.
ما هي طريقة التحليل الحيوي؟
طريقة تحليلية حيوية هي الطريقة التحليلية التي تقيس تركيز عنصر نشط في عينة بيولوجية. In a bioequivalence study, the blood samples taken from participants at defined time intervals are measured one by one with this method. ويشكل كل قياس نقطة واحدة على منحنى وقت التركيز الوارد وصفه في المواد السابقة. وبالتالي، فإن هذه الطريقة هي مصدر جميع البيانات التي تنتجها الدراسة.
ويجب إثبات أن هذه الطريقة الحاسمة جديرة بالثقة. وتسمى عملية الإثبات هذه عملية التحقق من الطريقة، وتُعرَّف بمبدأ توجيهي مشترك على نطاق دولي(1). وينص هذا المبدأ التوجيهي على الشروط التي ينبغي بموجبها اعتبار طريقة ما موثوقة، وعلى أي من خصائصها يجب اختبارها.
لِمَ (ل.م.م.م)؟
وكثيرا ما تكون تركيزات عنصر نشط في الدم منخفضة للغاية، وهذه العينة هي بيئة معقدة تحتوي على آلاف العناصر الأخرى. ومن أجل القياس الدقيق في هذه البيئة، هناك حاجة إلى الحساسية العالية والانتقائية العالية.
ويجمع هذان الشرطان معا. ويفصل الكروماتوغرافيا السائلة مكونات الخليط عن بعضها البعض؛ ويعترف المطياف الكتلي بالجزيء المستهدف ويقيسه حسب كتلته. This combination makes it possible to measure even very low concentrations reliably, distinguishing them from the other substances in the sample. ولهذا السبب، فإن الطريقة المفضلة في الدراسات الحديثة للتعادل البيولوجي هي إلى حد كبير هذه الطريقة.
معايير التحقق الأساسية
تقييم طريقة ما يعني اختباره من عدة زوايا ويضمن كل من هذه الاختبارات بعداً خاصاً لموثوقية القياس.
وتبين الانتقائية أن الطريقة يمكن أن تميز المادة المستهدفة عن المكونات الأخرى في العينة. ويحدد منحنى المعايرة العلاقة بين الإشارة المقيسة والتركيز الفعلي ويتيح حساب تركيز العينات غير المعروفة. وتصف الدقة مدى قرب القيمة المقيسة إلى القيمة الحقيقية؛ وتصف الدقة مدى قرب القياسات المتكررة لبعضها البعض.
The lower limit of quantification defines the lowest concentration the method can measure reliably; in studies where low concentrations matter, this limit is decisive. ويبين الاسترداد مدى إمكانية استرجاع المادة من العينة. التحقق من ما إذا كانت عينة واحدة تؤثر على العينة التالية. ويؤكد الاستقرار أن المادة لا تزال سليمة في العينة في ظروف التخزين والتجهيز.
أثر المصفوفة
ومن بين هذه البارامترات هناك أهمية خاصة بالنسبة للأساليب القائمة على المضاربة الجماعية: تأثير المصفوفة. ويمكن للعناصر الأخرى في العينة البيولوجية أن تعزز أو توقف إشارة قياس المادة المستهدفة. وإذا لم يؤخذ هذا الأثر في الحسبان، فإن القياس قد يعطي نتائج غير صحيحة بصورة منهجية. ولهذا السبب، فإن تقييم أثر المصفوفة يمثل خطوة منفصلة وناقدة في التصديق على أساليب إدارة السجلات والمحفوظات/الMS.
تحليل العينات الدراسية
فالتقييد ليس مجرد اختبار يجري في مرحلة الإعداد للطريقة. ويجب أيضا إثبات أن هذه الطريقة تحافظ على موثوقيتها في حين يجري تحليل عينات الدراسة الفعلية. ومن أجل ذلك، تقاس بعض العينات مرة أخرى في وقت مختلف وتتحقق من اتساقها مع النتيجة الأولى. ويؤكد هذا الشيك أن القياس لا يمكن الاعتماد عليه في ظروف مثالية فحسب، بل أيضا في إطار التدفق الحقيقي للدراسة.
إطار دولي واحد
وفي الماضي، كانت لمختلف المناطق مبادئ توجيهية منفصلة للتحقق من طريقة التحليل الأحيائي(23). وقد استخدمت هذه المبادئ التوجيهية بالتوازي لفترة طويلة. المبدأ التوجيهي الدولي المشترك وقد جمعت هذه النُهُج في وقت لاحق في إطار واحد وأصبحت اليوم المعيار الموحد الذي اعتمدته السلطات الرئيسية(). وتأخذ توركيي أيضاً المبادئ المقبولة دولياً كأساس لها في هذا المجال؛ وبهذه الطريقة، تتكلم البيانات التي تُنتج في مركز تركي نفس اللغة على نطاق دولي.
دور نانو توكس
وطوال هذه السلسلة، تكررت جملة واحدة: فحتى الدراسة الأكثر تصميما تفقد معناها إذا لم يكن القياس موثوقا به. والتثبت من طريقة التحليل البيولوجي هو بالتحديد الخطوة التي توفر هذه الموثوقية. وباعتبارنا مركزاً مأذوناً له بإجراء هذه الدراسات، فإن نانو توكس يستخدم الهياكل الأساسية الخاصة بها في مجال إدارة السجلات والمحفوظات/الMS، باستخدام أساليب مثبتة وفقاً للمبادئ التوجيهية الدولية. والقياس الدقيق والانتقائي والقابل للتكرار حتى بتركيزات منخفضة هو، بالنسبة لنا، ليس هدفا بل شرطا مسبقا للدراسة. القوة العلمية وراء نتيجة التكافؤ البيولوجي ولدت من هذه المؤسسة بالضبط
المراجع
(1) ICH M10. Bioanalytical Method Validation and Study Sample Analysis (Step 4, 24.05.2022). https://database.ich.org/sites/default/files/M10 Guideline Step4 2022 0524.pdf
(2) إدارة الأغذية والمخدرات في الولايات المتحدة. تقييم منهجية التحليل البيولوجي — Guidance for Industry (May 2018). https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry
(3) وكالة الأدوية الأوروبية. Guideline on bioanalytical method validation (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009 Rev. 1). https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/guideline-bioanalytical-method-validation en.pdf
