Bütün sonucun Biyoequivalence çalışması Tek bir ölçümde geri kalanlar: Kandaki aktif maddenin konsantrasyonu. Çalışmanın ne kadar iyi tasarlandığı önemli değil, eğer bu ölçüm güvenilir değilse, elde edilen sonuç da güvenilir değildir. Bu serinin önceki makalelerinde çalışma tasarımı, değişkenliği ve düzenleyici çerçeveyi ele aldık. Bu son makalede, tüm sürecin sessiz temelinde duran biyoanalytical yöntemi inceliyoruz ve bu ölçümlerin bugün ağırlıklı olarak yapıldığı LC-MS/MS tekniği.
Biyolojik bir yöntem nedir?
Biyolojik bir yöntem Biyolojik bir örnekteki aktif bir maddenin konsantrasyonunu ölçen analitik yöntemdir. Biyoequivalence çalışmada, belirlenen zaman aralıklarında katılımcılardan alınan kan örnekleri bu yöntemle bir tane ölçülür. Her ölçüm, önceki makalede açıklanan konsantrasyon-zaman eğrisinde bir nokta oluşturur. Bu nedenle, çalışmanın ürettiği tüm verilerin kaynağıdır.
Bu belirleyici bir yöntem güvenilir olduğu kanıtlanmıştır. Bu kanıt süreci yöntem doğrulama olarak adlandırılır ve uluslararası ölçekte ortak bir kılavuz tarafından tanımlanır.1 Bu kılavuz, bir yöntemin güvenilir olarak kabul edilmesi ve özelliklerinin test edilmesi gereken koşullar altında ortaya çıkmaktadır.
Neden LC-MS /MS?
Kandaki aktif bir maddenin konsantrasyonu genellikle son derece düşük ve örnek binlerce diğer bileşen içeren karmaşık bir ortamdır. Böyle bir ortamda doğru ölçmek için, hem yüksek hassasiyet hem de yüksek seçiciliğe ihtiyaç vardır.
LC-MS/MS bu iki gereksinimi birlikte getiriyor. Sıvı kromatografi, bir diğerinden karışımın bileşenlerini ayırır; Tandem kütle spektrometresi sonra hedef molekülü kitleye göre tanır ve ölçer. Bu kombinasyon, çok düşük konsantrasyonları güvenilir bir şekilde ölçmek, örnekteki diğer maddelerden ayırt etmek mümkün kılar. Bu nedenle modern biyoequivalans çalışmalarında tercih edilen yöntem büyük ölçüde bu.
Anahtar doğrulama parametreleri
Bir yöntemi doğrulamak, birkaç açıdan test etmek anlamına gelir.2 Bu testlerin her biri ölçümün güvenilirliğinin belirli bir boyutunu garanti eder.
Seçicilik, yöntemin hedef maddeyi örnekteki diğer bileşenlerden ayırt edebileceğini gösteriyor. Kalibrasyon eğrisi, ölçülen sinyal ve gerçek konsantrasyon arasındaki ilişkiyi tanımlar ve bilinmeyen örneklerin hesaplanmasına izin verir. Hassas değerin gerçek değere ne kadar yakın olduğunu açıklar; hassas tekrarlanan ölçümlerin birbiriyle nasıl yakın olduğunu açıklar.
En düşük ölçüm limiti yöntemin güvenilir bir şekilde ölçülebileceğini; düşük konsantrasyonların önemli olduğu çalışmalarda, bu limit belirleyicidir. Kurtarma, maddenin örnekten alınabileceği ölçüde gösterir. Bir örneğin bir sonraki etkiler olup olmadığını kontrol edin. Stability, maddenin depolama ve işleme koşulları altında numunede bozulmadığını doğrulamaktadır.
Matrix etkisi
Bu parametreler arasında, kütle spektrometriye dayanan yöntemler için özel bir önem vardır: matrix etkisi. Biyolojik örnekteki diğer bileşenler, hedef maddenin ölçüm sinyalini artırabilir veya bastırabilir. Bu etki dikkate alınmazsa, ölçüm sistematik olarak yanlış sonuçlar verebilir. Bu nedenle, matrix etkisinin değerlendirilmesi, LC-MS/MS yöntemlerinin geçerliliğinin ayrı ve kritik bir adımdır.
Çalışma örneklerinin analizi
Geçerlilik sadece yöntemin kurulum aşamasında yapılan bir test değildir. Yöntem ayrıca gerçek çalışma örnekleri analiz edildiğinde güvenilirliğini korumak için de gösterilmelidir. Bunun için, bazı örnekler farklı bir zamanda tekrar ölçülür ve ilk sonuçla tutarlılık için kontrol edilir. Bu kontrol, ölçüm sadece ideal koşullar altında değil aynı zamanda çalışmanın gerçek akışı içinde güvenilir olduğunu doğrulamaktadır.
Tek uluslararası çerçeve
Geçmişte, farklı bölgeler biyoanalytical yöntem geçerliliği için ayrı yönergeleri vardı.23 Bu kılavuzlar uzun bir süre paralel olarak kullanılmıştır. Ortak uluslararası kılavuz Daha sonra bu yaklaşımları tek bir çerçeve içinde bir araya getirdi ve bugün büyük yetkililer tarafından kabul edilen ortak standart haline geldi.1 Türkiye de bu alanda temel olarak uluslararası olarak kabul edilen ilkelere sahiptir; bu şekilde, bir Türk merkezinde üretilen veriler uluslararası ölçekte aynı dili konuşur.
NanoTox'un rolü
Bu seri boyunca, bir cümle yeniden alındı: en iyi tasarlanmış çalışma bile ölçüm güvenilir değilse anlamını kaybeder. Biyoanalytical yöntem geçerliliği tam olarak bu güvenilirlik sağlayan adımdır. Bir merkez bu çalışmaları yürütmek için yetkili olduğu gibi, NanoTox, uluslararası yönergelere uygun olarak doğrulanan yöntemlerle LC-MS/MS altyapısını kullanır. Doğru, seçici ve düşük konsantrasyonlarda bile tekrarlanabilir ölçüm, bizim için bir hedef değil, çalışmanın ön koşuludur. Biyoequivalence sonucu arkasındaki bilimsel sağlamlık tam olarak bu temelden doğar.
Referanslar Referanslar
1 ICH M10. Bioanalytical Method Validasyon ve Çalışma Örnek Analizi (Adım 4, 24.05.2022). https://database.ich.org/sites/default/files/M10 Guideline Step4 2022 0524.pdf
2 ABD Gıda ve İlaç Yönetimi. Bioanalytical Method Validation — Endüstri için Rehberlik (Mayıs 2018). https://www.fda.gov/regulatory-bilgi/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry
3 Avrupa Tıp Ajansı. Biyoanalytical yöntemine kılavuzluk (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009 Rev. 1). https://www.ema.europa.eu/en/documents/bilimsel-guideline/guideline-bioanalytical-method-validation en.pdf