Весь результат а исследование биоэквивалентности Покоится на одном измерении: концентрации действующего вещества в крови. Независимо от того, насколько хорошо разработано исследование, если это измерение не является надежным, полученный результат также не является надежным. В предыдущих статьях этой серии мы рассмотрели дизайн исследования, изменчивость и нормативную базу. В этой заключительной статье мы рассмотрим валидацию биоаналитического метода, который лежит в основе всего процесса, и технику LC-MS / MS, с которой эти измерения в основном проводятся сегодня.
Что такое биоаналитический метод?
Биоаналитический метод Это аналитический метод, который измеряет концентрацию активного ингредиента в биологическом образце. В исследовании биоэквивалентности образцы крови, взятые у участников с определенными временными интервалами, измеряются по одному с помощью этого метода. Каждое измерение формирует одну точку на кривой времени концентрации, описанной в предыдущих статьях. Таким образом, метод является источником всех данных, которые дает исследование.
Метод этот решающий должен быть доказан, чтобы быть надежным. Этот процесс доказывания называется методом валидации и определяется общим руководством в международном масштабе.1 В этом руководстве указывается, при каких условиях метод должен считаться надежным и какие из его характеристик должны быть проверены.
Почему LC-MS?
Концентрации активного ингредиента в крови часто чрезвычайно низки, и образец представляет собой сложную среду, содержащую тысячи других компонентов. Для точного измерения в такой среде необходимы как высокая чувствительность, так и высокая избирательность.
LC-MS/MS объединяет эти два требования. Жидкая хроматография отделяет компоненты смеси друг от друга; тандемная масс-спектрометрия затем распознает и измеряет молекулу-мишень в соответствии с ее массой. Такое сочетание позволяет надежно измерять даже очень низкие концентрации, отличая их от других веществ в образце. По этой причине метод, предпочтительный в современных исследованиях биоэквивалентности, в значительной степени является именно таким.
Основные параметры валидации
Проверка метода означает испытание его под несколькими углами.2 Каждый из этих тестов обеспечивает определенный уровень надежности измерений.
Селективность показывает, что способ может отличать целевое вещество от других компонентов в образце. Калибровочная кривая определяет связь между измеренным сигналом и фактической концентрацией и позволяет рассчитать концентрацию неизвестных образцов. Точность описывает, насколько близко измеренное значение к истинному значению; точность описывает, насколько близко повторяющиеся измерения друг к другу.
Нижний предел количественной оценки определяет наименьшую концентрацию, которую метод может надежно измерить; в исследованиях, где имеют значение низкие концентрации, этот предел является решающим. Восстановление показывает степень, в которой вещество может быть извлечено из образца. Перенос проверяет, влияет ли один образец на следующий. Стабильность подтверждает, что вещество остается неповрежденным в образце в условиях хранения и обработки.
Эффект матрицы
Среди этих параметров есть один, имеющий особое значение для методов, основанных на масс-спектрометрии: матричный эффект. Другие компоненты в биологическом образце могут усиливать или подавлять измерительный сигнал целевого вещества. Если этот эффект не учитывать, то измерение может дать систематически неверные результаты. По этой причине оценка матричного эффекта является отдельным и критическим шагом в валидации методов LC-MS/MS.
Анализ исследуемых образцов
Валидация – это не только тест, проводимый на этапе установки метода. Метод также должен быть показан для поддержания его надежности при анализе фактических образцов исследования. Для этого некоторые образцы снова измеряются в разное время и проверяются на соответствие первому результату. Эта проверка подтверждает, что измерение достоверно не только в идеальных условиях, но и в реальном потоке исследования.
Единая международная структура
В прошлом в разных регионах существовали отдельные руководящие принципы валидации биоаналитических методов23. Эти принципы использовались параллельно в течение длительного времени. Общее международное руководство подготовленные позднее, объединили эти подходы в единую структуру и сегодня стали общим стандартом, принятым основными органами власти1. Тюркие также берет за основу международно признанные принципы в этой области; таким образом, данные, полученные в турецком центре, говорят на том же языке в международном масштабе.
Роль NanoTox
На протяжении всей этой серии повторялось одно предложение: даже самое лучшее исследование теряет свой смысл, если измерение не является надежным. Валидация биоаналитического метода является именно тем шагом, который обеспечивает эту надежность. В качестве центра, уполномоченного проводить эти исследования, NanoTox использует свою инфраструктуру LC-MS / MS с методами, проверенными в соответствии с международными руководящими принципами. Точные, селективные и воспроизводимые измерения даже при низких концентрациях являются для нас не целью, а предварительным условием исследования. Научная устойчивость, стоящая за результатом биоэквивалентности, рождается именно из этой основы.
Ссылки
1 ICH M10. Валидация биоаналитического метода и анализ выборочных образцов исследования (Шаг 4, 24.05.2022). https://database.ich.org/sites/default/files/M10 Guideline Step4 2022 0524.pdf
2 Управление по контролю за продуктами и лекарствами США. Биоаналитический метод проверки — Руководство для промышленности (май 2018). https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-metod-validation-guidance-industry
3 Европейское агентство лекарственных средств. Руководство по валидации биоаналитического метода (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009 Rev. 1). https://www.ema.europa.eu/en/documents/cientific-guideline/guideline-bioanalytical-method-validation en.pdf
