OCDE TG 437 / 438 / 492: Análisis comparativo de alternativas in Vitro para la irritación ocular

La evaluación de la irritación y la corrosión de los ojos es un componente crítico del perfil de seguridad de los productos químicos, pesticidas, cosméticos y productos industriales. Tradicionalmente, esta evaluación se realizó utilizando in vivo pruebas (OECD TG 405) en un modelo de conejo; sin embargo, de acuerdo con los principios 3R y avances científicos, validados in vitro y ex vivo alternativas han llegado a la vanguardia. Las alternativas más utilizadas son las OCDE TG 437 (BCOP), OCDE TG 438 (ICE), y OCDE TG 492 (RhCE) directrices.

En los últimos tres años, estos tres in vitro/ex vivo los métodos han representado más del 70 por ciento de los estudios de irritación ocular que hemos realizado en nuestro laboratorio. En particular, tras la prohibición completa de las pruebas de animales en virtud del Reglamento de Cosméticos de la UE en 2023, hemos observado un aumento significativo de las solicitudes de fabricantes de cosméticos y productos de cuidado personal. En este artículo compartiremos la base científica de cada una de estas tres directrices, las diferencias en su aplicación práctica, y la experiencia de campo de nuestro laboratorio en esta área.

OCDE TG 437: Prueba de la capacidad corneal y la permeabilidad (BCOP)

OCDE TG 437 es un ex vivo prueba que utiliza las córneas de ojos bovinos obtenidas de mataderos. El principio básico de la prueba consiste en colocar las córneas aisladas en soportes especiales y aplicar la sustancia de la prueba a la superficie corneal. Los efectos tóxicos se evalúan midiendo la opacidad corneal (cloudiness) y la permeabilidad. El in vitro La puntuación de irritación, derivada de la combinación de estos dos parámetros, se utiliza para determinar la clasificación GHS de la sustancia.

El reto más común que enfrentamos al realizar la prueba BCOP en nuestro laboratorio es mantener la frescura de las muestras de maíz. Los ojos obtenidos del matadero deben ser entregados al laboratorio dentro de las primeras cuatro horas después de la matanza, y las córneas deben estar aisladas y preparadas para la prueba dentro de este plazo. Debido a este requisito logístico, programamos la prueba BCOP sólo en días específicos y coordinamos con el matadero de antemano. Además, aunque las córneas bovinas comparten un alto grado de similitud estructural con las córneas humanas, las diferencias en el espesor corneal y el número de capas epiteliales pueden dar lugar a resultados falsos negativos con ciertos reactivos sensibles. En tales casos, aumentamos la sensibilidad incorporando el examen histopatológico.

La ventaja más importante de la BCOP es que, ya que se obtiene como subproducto de mataderos, no plantea ninguna preocupación ética. Fue aprobado por la OCDE en 2009 y actualizado en 2013 y 2025. Sin embargo, la prueba mide sólo los parámetros de opacidad y permeabilidad de la córnea; no puede modelar factores como la película lágrima, respuesta inmune y curación de tejidos. Puede limitarse a predecir el potencial de daño ocular grave causado por mezclas complejas, como formulaciones plaguicidas.

OCDE TG 438: Prueba de los ojos aislados de pollo (ICE)

OCDE TG 438 es un ex vivo prueba que utiliza los ojos obtenidos de pollos. Dado que los pollos son masacrados para el consumo de alimentos, la prueba no requiere el uso de animales. El principio de la prueba implica colocar el ojo aislado en un soporte y aplicar la sustancia de la prueba a la superficie corneal. Los efectos tóxicos se evalúan sobre la base de cuatro parámetros: opacidad corneal, daño epitelial (retención de la fluoresceina), mayor espesor corneal (hinchazón) y daño morfológico macroscópico.

En la aplicación de nuestro laboratorio de la prueba ICE, logramos una alta precisión, especialmente para los surfactantes y productos de limpieza basados en alcohol. El año pasado, en un estudio ICE realizado para un fabricante de productos de limpieza industrial, identificamos con éxito el potencial del producto para "Serious Eye Damage" (Categoría 1) y facilitamos la revisión del fabricante de la formulación. Este caso es valioso para demostrar lo eficaz que es la prueba ICE, especialmente con surfactantes.

El examen del ICE fue aprobado por la OCDE en 2009 y actualizado en 2013 y 2025. Sus ventajas más significativas son su capacidad para medir parámetros físicos como la inflamación de la corneal y el potencial para mejorar su sensibilidad mediante el examen histopatológico. Sin embargo, como la BCOP, la prueba ICE utiliza sólo ex vivo tejido y no refleja plenamente la biología humana; no puede modelar interacciones vasculares e inmunitarias.

OCDE TG 492: Prueba del Corneal Humano Reconstituido como el Epitelio (RhCE)

OCDE 492 es un in vitro prueba que utiliza modelos de tejido tridimensional imitando el epitelio corneal humano. Estos modelos son las culturas tisulares derivadas de células epiteliales corneales humanas que preservan la estructura multicapa, la función de barrera y la actividad metabólica del epitelio corneal. El principio de la prueba implica aplicar la sustancia de prueba al tejido RhCE durante un período específico de tiempo y luego medir la viabilidad celular utilizando el ensayo MTT.

La ventaja más importante de la prueba RhCE es que, porque utiliza células humanas, permite la extrapolación directa a la biología humana. En nuestro laboratorio, utilizamos este método como prueba de detección primaria, especialmente para productos cosméticos y de atención personal. Dado que las pruebas de animales están prohibidas en el Reglamento de Cosméticos de la UE, RhCE es la única opción obligatoria para este sector.

Sin embargo, los modelos de prueba RhCE sólo el epitelio corneal superficial; no puede evaluar las interacciones con estructuras oculares más profundas, dinámicas de la película lágrima o curación de tejidos. Además, TG 492 sólo puede distinguir entre "No Requiring Classification" y "Irritant"; no es suficiente por sí solo para una clasificación "Serious Eye Damage" (Categoría 1). Por lo tanto, recomendamos realizar pruebas complementarias con BCOP o ICE, especialmente para posibles sustancias de la categoría 1.

En el cuadro que figura a continuación se presenta un resumen comparativo de las características principales de las directrices TG 437, TG 438 y TG 492.

Enfoques definidos y estrategias integradas de ensayo

La OCDE se ha desarrollado Enfoques definidos (DA) para casos en que un solo in vitro La prueba es insuficiente para la evaluación de la irritación ocular. Estos enfoques tienen por objeto reducir o eliminar por completo la necesidad de in vivo Dibujar la prueba combinando los resultados de diferentes in vitro pruebas. Hay cinco DA aceptados bajo TG 467 de la OCDE: DAs for Liquids (DAL-1 y DAL-2), DAs for Solids (DAS) y DAs for Surfactants (DASF).

En nuestro laboratorio aplicamos estos DA, especialmente para formulaciones complejas. Por ejemplo, el año pasado usamos el enfoque DAL-2 (BCOP + STE) para el nuevo gel de limpieza facial de un fabricante cosmético. Mientras que la prueba RhCE solo produjo un resultado "no irritante", la combinación DAL-2 reveló el potencial "mildly irritante" del producto, lo que nos llevó a ayudar al fabricante a hacer una revisión menor de la formulación. Este caso demuestra cómo las estrategias de pruebas integradas proporcionan resultados más fiables en comparación con las pruebas individuales.

Realización de Tests de Irritación Ocular en nuestro Laboratorio

En nuestro laboratorio certificado por GLP, realizamos pruebas de irritación ocular cubiertas por TG 437, TG 438 y TG 492 en pleno cumplimiento de las normas internacionales. Utilizamos sistemas de prueba validados para los tres métodos; para ex vivo pruebas, fuente de maíz fresco bovino y ojos de pollo, mientras para in vitro pruebas, utilizamos modelos validados de RhCE.

Nuestro proceso de prueba comienza con una evaluación preliminar completa. Se examinan las propiedades fisicoquímicas de la sustancia de prueba, el valor de pH, la solubilidad y la estructura química. Sobre la base de esta información, se determina el método de prueba más adecuado o la combinación de métodos de prueba. Los resultados de las pruebas se interpretan e informan según los criterios del SMA.

Una de las principales ventajas de nuestro laboratorio es que ofrecemos varias in vitro y ex vivo métodos como parte de una estrategia integrada. Para un producto dado, la prueba de detección más adecuada se realiza primero; si los resultados son inconclusivos o si la autoridad reguladora lo solicita específicamente, se utilizan pruebas complementarias o DA. Este enfoque gradual garantiza la eficiencia en términos de tiempo y costo.

Preguntas Frecuentes

Una de las preguntas más comunes que recibimos con respecto a la OCDE TG 437, 438 y 492 es la prueba adecuada para qué producto. TG 437 (BCOP) es adecuado para sustancias en formas líquidas, sólidas y de pasta, así como sustancias insolubles en agua. TG 438 (ICE) es particularmente ideal para surfactantes, alcoholes y sustancias solubles en agua. TG 492 (RhCE), por otro lado, se prefiere para cosméticos, productos de cuidado personal y sustancias solubles en agua. Nuestro laboratorio evalúa las propiedades de la sustancia de prueba para recomendar el método más adecuado o la combinación DA.

In vitro a menudo se pregunta si pueden reemplazar in vivo pruebas. Sí, validado in vitro pruebas y combinaciones DA permiten la clasificación sin necesidad de in vivo pruebas. La OCDE y la UE REACH reconocen estos in vitro métodos como pruebas primarias. Sin embargo, in vivo La validación puede ser necesaria si los resultados de las pruebas son inconclusivos o si la autoridad reguladora lo solicita específicamente.

En cuanto a la duración de las pruebas, TG 437 y TG 492 suelen producir resultados en un plazo de 1 a 2 semanas; sin embargo, TG 438 puede tardar de 2 a 3 semanas debido a la adquisición de tejidos y mediciones de inflamación. La duración total es de 3 a 5 semanas. Por último, se plantea la cuestión de qué propuestas reglamentarias pueden utilizarse estas pruebas. Los informes TG 437, 438 y 492 son válidos para REACH de la UE, Reglamento CLP, clasificación GHS, Reglamento de Cosméticos de la UE y requisitos de KKDIK turco.

Los métodos in vitro y ex vivo en la evaluación de la irritación de los ojos forman la base de un enfoque moderno que combina la precisión científica con la responsabilidad ética. Con nuestras pruebas, que cumplen plenamente con los estándares TG 437, TG 438 y TG 492 de la OCDE, evaluamos el perfil de seguridad ocular de sus productos a los más altos estándares científicos—sin necesidad de pruebas animales. Nuestro laboratorio certificado por GLP, equipado con modelos de tejido validados, un equipo experimentado y estrategias de pruebas integradas, es su socio confiable para todas las necesidades de pruebas de irritación de los ojos. Contáctenos para demostrar la seguridad ocular de su producto.