OECD TG 437 / 438 / 492: Сравнительный анализ альтернатив in vitro для раздражения глаз

Оценка раздражения глаз и коррозии является критическим компонентом профиля безопасности химических веществ, пестицидов, косметики и промышленных продуктов. Традиционно эта оценка проводилась с использованием in vivo Тесты (OECD TG 405) на кроличью модель; однако, в соответствии с принципами 3R и научными достижениями, подтверждены in vitro и ex vivo Альтернативы вышли на первый план. Наиболее распространенными из этих альтернатив являются OECD TG 437 (BCOP), OECD TG 438 (ICE), и OECD TG 492 (RhCE) руководящие принципы.

За последние три года эти три in vitro/ex vivo На эти методы приходится более 70% исследований раздражения глаз, проведенных в нашей лаборатории. В частности, после полного запрета испытаний на животных в соответствии с Регламентом ЕС по косметике в 2023 году мы наблюдали значительное увеличение запросов от производителей косметики и средств личной гигиены. В этой статье мы поделимся научными основами каждого из этих трех руководящих принципов, различиями в их практическом применении и опытом нашей лаборатории в этой области. [+]

OECD TG 437: тест на непрозрачность и проницаемость роговицы (BCOP)

ОЭСР TG 437 является ex vivo Тест, который использует роговицы бычьих глаз, полученные с бойни. Основной принцип испытания включает размещение изолированных роговиц в специальных держателях и нанесение исследуемого вещества на поверхность роговицы. Токсические эффекты оцениваются путем измерения непрозрачности роговицы (облачность) и проницаемости. The in vitro Оценка раздражения, полученная путем объединения этих двух параметров, используется для определения классификации СГС вещества.

Наиболее распространенной проблемой, с которой мы сталкиваемся при проведении теста BCOP в нашей лаборатории, является поддержание свежести образцов роговицы. Глаза, полученные со скотобойни, должны быть доставлены в лабораторию в течение первых четырех часов после убоя, а роговицы должны быть изолированы и подготовлены для тестирования в течение этого периода времени. В связи с этим материально-техническим требованием мы планируем проведение БКОП-теста только в определенные дни и согласовываем его с бойней заранее. Кроме того, хотя роговицы крупного роговицы имеют высокую степень структурного сходства с роговицей человека, различия в толщине роговицы и количестве эпителиальных слоев могут привести к ложноотрицательным результатам с некоторыми чувствительными реагентами. В таких случаях мы повышаем чувствительность путем включения гистопатологического исследования.

Наиболее значительным преимуществом БКОП является то, что, поскольку он получен в качестве побочного продукта скотобойни, он не представляет никаких этических проблем. Он был принят ОЭСР в 2009 году и обновлен в 2013 и 2025 годах. Тем не менее, тест измеряет только параметры непрозрачности и проницаемости роговицы; он не может моделировать такие факторы, как слезная пленка, иммунный ответ и заживление тканей. Он может быть ограничен в прогнозировании возможности серьезного повреждения глаз от сложных смесей, таких как пестицидные составы.

OECD TG 438: тест на изолированный куриный глаз

ОЭСР TG 438 является ex vivo Тест, в котором используются глаза, полученные от кур. Поскольку кур убивают для употребления в пищу, тест не требует использования животных. Принцип испытания заключается в размещении изолированного глаза в держателе и нанесении исследуемого вещества на поверхность роговицы. Токсические эффекты оцениваются на основе четырех параметров: непрозрачность роговицы, повреждение эпителия (удержание флуоресцеина), увеличение толщины роговицы (набухание) и макроскопическое морфологическое повреждение.

При применении теста ICE в нашей лаборатории мы достигаем высокой точности, особенно для поверхностно-активных веществ и чистящих средств на основе алкоголя. В прошлом году в исследовании ICE, которое мы провели для производителя промышленных чистящих средств, мы успешно определили потенциал продукта для «серьезного повреждения глаз» (категория 1) и способствовали пересмотру производителем состава. Этот случай имеет важное значение для демонстрации эффективности теста ICE, особенно с поверхностно-активными веществами.

Тест ICE был принят ОЭСР в 2009 году и обновлен в 2013 и 2025 годах. Его наиболее значительными преимуществами являются его способность измерять физические параметры, такие как отек роговицы и потенциал для повышения его чувствительности посредством гистопатологического исследования. Однако, как и в случае с BCOP, в тесте ICE используется только ex vivo ткань и не полностью отражает биологию человека; она не может моделировать сосудистые и иммунные взаимодействия.

Тест TG 492: восстановленный эпителий, подобный человеческому роговице (RhCE)

ОЭСР TG 492 является in vitro Тест, который использует трехмерные модели тканей, имитирующие эпителий роговицы человека. Эти модели представляют собой культуры тканей, полученные из эпителиальных клеток роговицы человека, которые сохраняют многослойную структуру, барьерную функцию и метаболическую активность эпителия роговицы. Принцип теста включает применение тестируемого вещества к ткани RhCE в течение определенного периода времени, а затем измерение жизнеспособности клеток с использованием анализа MTT.

Наиболее значительным преимуществом теста RhCE является то, что, поскольку он использует клетки человека, он позволяет проводить прямую экстраполяцию на биологию человека. В нашей лаборатории мы используем этот метод в качестве основного скринингового теста, особенно для косметических средств и средств личной гигиены. Поскольку тестирование на животных запрещено в соответствии с Регламентом ЕС по косметике, RhCE является единственным обязательным вариантом для этого сектора.

Тем не менее, тест RhCE моделирует только поверхностный эпителий роговицы; он не может оценить взаимодействия с более глубокими структурами глаз, динамикой слезной пленки или заживлением тканей. Кроме того, TG 492 может различать только «Не требующую классификацию» и «Раздражитель»; его недостаточно для классификации «серьезного повреждения глаз» (категория 1). Поэтому мы рекомендуем проводить дополнительное тестирование с BCOP или ICE, особенно для потенциальных веществ категории 1.

В приведенной ниже таблице приводится сравнительный обзор основных характеристик руководящих принципов ОЭСР по ТГ 437, ТГ 438 и ТГ 492.

Определенные подходы и комплексные стратегии тестирования

ОЭСР разработала Определенные подходы (DA) Для случаев, когда один in vitro Тест недостаточно для оценки раздражения глаз. Эти подходы направлены на то, чтобы уменьшить или полностью устранить необходимость in vivo Тест драйза путем объединения результатов различных in vitro Тесты. Существует пять DA, принятых в рамках ОЭСР TG 467: DA для жидкостей (DAL-1 и DAL-2), DA для твердых веществ (DAS) и DA для сурфактантов (DASF).

В нашей лаборатории мы применяем эти DA, особенно для сложных составов. Например, в прошлом году мы использовали подход DAL-2 (BCOP + STE) для нового геля для чистки лица косметического производителя. В то время как один только тест RhCE дал «не раздражающий» результат, комбинация DAL-2 показала «мягко раздражающий» потенциал продукта, что привело к тому, что мы помогли производителю внести незначительный пересмотр в состав. Этот случай демонстрирует, как интегрированные стратегии тестирования обеспечивают более надежные результаты по сравнению с единичными тестами.

Проведение тестов на раздражение глаз в нашей лаборатории

В нашей сертифицированной GLP лаборатории мы проводим тесты на раздражение глаз, охватываемые OECD TG 437, TG 438 и TG 492, в полном соответствии с международными стандартами. Мы используем проверенные тестовые системы для всех трех методов. ex vivo Тесты, мы получаем свежие роговицы крупного рогатого скота и глаза курицы, в то время как для in vitro Мы используем проверенные модели RhCE.

Процесс тестирования начинается с комплексной предварительной оценки. Исследуются физико-химические свойства исследуемого вещества, значение pH, растворимость и химическая структура. На основе этой информации определяется наиболее подходящий метод испытаний или комбинация методов испытаний. Результаты теста интерпретируются и сообщаются в соответствии с критериями GHS.

Одним из основных преимуществ нашей лаборатории является то, что мы предлагаем различные in vitro и ex vivo Методы как часть комплексной стратегии. Для данного продукта сначала проводится наиболее подходящий скрининговый тест; если результаты неубедительны или если регулирующий орган специально запрашивает его, используются дополнительные тесты или DA. Этот поэтапный подход обеспечивает эффективность с точки зрения времени и стоимости.

Часто Задаваемые Вопросы

Один из наиболее распространенных вопросов, который мы получаем в отношении ТГ 437, 438 и 492 ОЭСР, заключается в том, какой тест подходит для какого продукта. TG 437 (BCOP) подходит для веществ в жидкой, твердой и пастообразной формах, а также нерастворимых в воде веществ. TG 438 (ICE) особенно подходит для поверхностно-активных веществ, спиртов и водорастворимых веществ. С другой стороны, TG 492 (RhCE) является предпочтительным для косметических средств, средств личной гигиены и водорастворимых веществ. Наша лаборатория оценивает свойства тестируемого вещества, чтобы рекомендовать наиболее подходящий метод или комбинацию DA.

In vitro Часто спрашивают, могут ли они заменить результаты теста. in vivo Тесты. Да, проверено in vitro тесты и комбинации DA позволяют проводить классификацию без необходимости in vivo Тестирование. ОЭСР и ЕС REACH признают это. in vitro Методы как первичные тесты. Однако, in vivo Валидация может потребоваться, если результаты испытаний являются неубедительными или если регулирующий орган специально запрашивает их.

Что касается продолжительности тестирования, TG 437 и TG 492 обычно дают результаты в течение 1-2 недель; TG 438, однако, может занять 2-3 недели из-за заготовки тканей и измерений набухания. Включая отчетность и проверку качества, общая продолжительность составляет 3-5 недель. Наконец, возникает вопрос о том, для каких нормативных документов могут использоваться эти тесты. Отчеты TG 437, 438 и 492 действительны для ЕС REACH, Регламента CLP, классификации GHS, Регламента ЕС по косметике и турецких требований KKDIK.

Методы in vitro и ex vivo в оценке раздражения глаз составляют основу современного подхода, сочетающего научную точность с этической ответственностью. Наши тесты полностью соответствуют стандартам OECD TG 437, TG 438 и TG 492, и мы оцениваем профиль безопасности глаз вашей продукции по самым высоким научным стандартам.—без необходимости тестирования на животных. Наша сертифицированная GLP лаборатория, оснащенная проверенными моделями тканей, опытной командой и интегрированными стратегиями тестирования, является вашим надежным партнером для всех ваших потребностей в тестировании на раздражение глаз. Свяжитесь с нами, чтобы продемонстрировать безопасность вашего продукта.