经合组织 TG 437 / 438 / 492: 刺激眼睛的活性替代物的比较分析

眼刺激和腐蚀评估是化学品、农药、化妆品和工业产品安全情况的重要组成部分。 传统上,这种评估是利用下列方法进行的: 阴道 兔子模型中的试验(OECD TG 405);然而,按照3R原则和科学进步,验证 试管 和 前维沃 备选办法已摆在最前列。 其中最广泛使用的替代品是: 经合组织TG 437 (BCOP), 经合组织第438技术小组(ICE),以及 经合组织TG 492(RhCE) 准则。

过去三年来,这3个 试管/前维沃 方法占了我们在实验室中进行的眼刺激研究的70%以上。 特别是,2023年欧盟化妆品条例全面禁止动物检验后,我们观察到化妆品和个人护理产品制造商提出的要求大幅增加. 在本条中,我们将分享这三项准则的科学基础、其实际应用的不同之处以及我们实验室在这一领域的实地经验。

经合组织 TG 437: Bovine Corneal 不透明与渗透性(BCOP)试验

经合组织 TG 437 是一个 前维沃 使用从屠宰场得到的牛眼角膜的试验 试验的基本原则是将孤立的角膜放入特殊囊中,并将试验物质放入角膜表面。 通过测量角膜不透明(云)和渗透性来评估毒性影响。 这个 试管 综合这两个参数得出的刺激分数用于确定该物质的全球统一制度分类。

在实验室进行BCOP测试时,我们面临的最常见挑战是保持角膜样品的新鲜度。 从屠宰场得到的眼睛必须在屠宰后的头四个小时内被送到实验室,角膜必须被隔离,并准备在这一时限内进行测试. 由于这种后勤需要,我们只在特定的日子安排BCOP测试,并提前与屠宰场协调. 此外,虽然牛角膜与人类角膜具有高度的结构相似性,但角膜厚度和上皮层数量的差异会导致某些敏感试剂产生假负作用. 在这种情况下,我们通过纳入组织病理学检查来提高敏感性。

BCOP最显著的优势在于,由于它是作为屠宰场的副产品而得到的,因此不会引起任何伦理问题. 经合组织于2009年通过了《公约》,并于2013年和2025年进行了更新。 然而,测试只测量角膜的不透明性和通透性参数;它不能模拟泪膜,免疫反应和组织愈合等因素. 在预测农药制剂等复杂混合物可能造成严重眼损伤方面可能受到限制。

经合组织 TG 438:隔离鸡眼试验

经合组织 TG 438 是一个 前维沃 用鸡眼做的试验 由于鸡肉被屠宰以取食用,试验不需要使用动物. 试验的原则是将隔离眼放入持有人体内,并将试验物质应用于角膜表面。 根据以下四个参数评估了毒性影响:角膜不透明、上位损伤(荧光素保留)、角膜厚度增加(生境)和宏观形态损害。

在我们实验室应用ICE测试时,我们取得了很高的精度,特别是表面活性剂和以酒精为原料的清洁产品。 去年,我们在对一家工业清洁产品制造商进行的一次ICE研究中,成功地确定了该产品"严重眼损伤"的可能性(第1类),并促进了制造商对制剂的修订。 这个案例很有价值,可以证明ICE测试的有效性,特别是在表面活性剂方面。

经合组织于2009年通过了ICE测试,并于2013年和2025年进行了更新。 其最显著的优点是能够测量角肿等物理参数,并且有可能通过组织病理学检查来增强它的敏感性. 然而,与BCOP一样,ICE测试只使用 前维沃 组织,不能充分反映人类生物学;它不能模拟血管和免疫相互作用。

经合组织 TG 492: 重新组成的人角质-类似 E(RhCE)测试

经合组织 TG 492 是一个 试管 测试使用三维组织模型模仿了人类角膜上皮. 这些模型是从人类角膜上皮细胞所衍生出的组织培养物,这些细胞保存了多层结构,屏障功能和角膜上皮的代谢活性. 试验的原则是将试验物质应用于RhCE组织一段时间,然后使用MTT测定法测量细胞的可行性。

RhCE测试最显著的优点是,由于它使用人类细胞,因此可以直接推断出人类生物学. 在我们的实验室,我们使用这种方法作为主要筛选测试,特别是对化妆品和个人护理产品。 由于欧盟化妆品条例禁止动物检测,RhCE是该部门的唯一强制性选择.

然而,RhCE测试模型仅是表面的角膜上皮;它不能评估与更深的眼结构,泪膜动力学,或组织愈合的相互作用. 此外,TG 492只能区分"不需要分类"和"刺激";它本身不足以进行"严重眼损伤"(Category 1)分类. 因此,我们建议与BCOP或ICE进行补充测试,特别是针对潜在的第1类物质。

下表提供了经合组织437、438和492技术赠款准则的主要特点的比较摘要。

界定的方法和综合测试战略

经合组织制定了 界定的方法(DA) 单项 试管 测试不足以进行眼刺激评估。 这些方针旨在减少或完全消除对《公约》和 阴道 通过合并不同测试结果来进行 试管 测试。 根据经合组织第467号指令,有5个DA被接受:液体DAL-1和DAL-2)、固体DA(DAS)和冲浪剂DA(DASF)。

在我们的实验室,我们使用这些DA, 特别是用于复杂的配方。 例如,去年,我们用DAL-2(BCOP + STE)方法制造了化妆品制造商的新面部净化胶。 虽然光是RhCE测试就得出了"无刺激"的结果,但DAL-2组合揭示出该产品"极具刺激性"的潜力,导致我们帮助制造商对配方略作修改. 这一案例表明,与单一测试相比,综合测试战略提供了更可靠的结果。

在实验室进行眼刺激试验

在我们的GLP认证实验室,我们完全按照国际标准进行经合组织TG 437、TG 438和TG 492所涵盖的眼刺激试验。 我们对所有三种方法使用经过验证的测试系统; 前维沃 检测,我们源 新鲜牛角膜和鸡眼,同时 试管 测试,我们使用有效的RhCE模型。

我们的测试过程首先要进行全面的初步评估。 试验物质的物理化学性质、pH值、可溶性和化学结构都经过审查。 根据这一信息,确定最适当的试验方法或试验方法的组合。 测试结果按照全球统一制度标准加以解释和报告。

我们实验室的主要优势之一是 我们提供各种 试管 和 前维沃 作为综合战略的一部分。 对于某一产品,应首先进行最适当的筛选测试;如果结果没有结果,或者如果管理当局具体要求,则采用补充测试或DA测试。 这种循序渐进的做法确保了时间和成本两方面的效率。

常见问题

我们收到的有关经合组织TG 437、438和492的最常见问题之一是哪种试验适合哪种产品。 TG 437 (BCOP) 适用于以液体,固体和粘贴形式存在的物质,以及可溶于水的物质. TG 438(ICE)对于表面活性剂,酒精和可溶于水的物质特别理想. 另一方面,TG 492 (RhCE)则更倾向于化妆品,个人护理产品和可溶于水的物质. 我们的实验室评估测试物质的特性,以推荐最合适的方法或DA组合.

体外活动 测试结果经常被问及是否可以替换 阴道 测试。 是,已验证 试管 测试和DA组合可以进行分类,而不需要 阴道 测试。 经合组织和欧盟认识到这些 试管 方法作为初级测试。 不过, 阴道 如果试验结果无定论,或管理机构具体要求验证,则可能需要验证。

关于测试期限,TG 437和TG 492一般在1至2周内产生结果;然而,由于组织采购和肿胀测量,TG 438可能需要2至3周。 包括报告和质量保证审查在内,总期限为3至5周。 最后,问题是这些测试可用于何种监管提交材料。 437、438和492土耳其盾的报告适用于欧盟REACH、CLP条例、全球统一制度分类、欧盟化妆品条例和土耳其KKDIK要求。

眼刺激评估中的体外和外活性方法构成了将科学准确性和道德责任相结合的现代方法的基础. 我们的测试完全符合经合组织的TG 437、TG 438和TG 492标准,我们以最高科学标准评估了你们产品的外观安全情况。—不需要动物测试。 我们的GLP认证实验室,配备了经过验证的组织模型,一个经验丰富的团队,以及综合测试策略,是您所有眼刺激测试需求的可靠合作伙伴. 请联系我们,以证明您的产品具有外观安全性。