OCDE TG 437 / 438 / 492: Analyse comparative des alternatives in vitro pour l'irritation oculaire

L'évaluation de l'irritation oculaire et de la corrosion est un élément essentiel du profil de sécurité des produits chimiques, pesticides, cosmétiques et industriels. Traditionnellement, cette évaluation a été effectuée en utilisant in vivo tests (OCDE TG 405) dans un modèle de lapin; cependant, conformément aux principes 3R et aux progrès scientifiques, validés in vitro et ex vivo Les solutions de rechange sont arrivées au premier plan. Les solutions les plus utilisées sont les suivantes: OCDE TG 437 (BCOP), OCDE TG 438 (ICE), et OCDE TG 492 (RhCE) directives.

Ces trois dernières années, in vitro/ex vivo plus de 70 % des études sur l'irritation oculaire que nous avons menées en laboratoire. En particulier, à la suite de l'interdiction complète des essais sur les animaux prévue par le règlement de l'UE sur les cosmétiques en 2023, nous avons observé une augmentation significative des demandes des fabricants de cosmétiques et de produits de soins personnels. Dans cet article, nous partagerons la base scientifique de chacune de ces trois lignes directrices, les différences dans leur application pratique, et notre expérience de laboratoire dans ce domaine.

OCDE TG 437: Essai d'opacité et de perméabilité de la cornée bovine (BCOP)

OCDE TG 437 est un ex vivo test utilisant les cornées des yeux de bovins obtenues à partir d'abattoirs. Le principe de base de l'essai consiste à placer des cornées isolées dans des supports spéciaux et à appliquer la substance d'essai à la surface cornée. Les effets toxiques sont évalués en mesurant l'opacité cornéenne (clodité) et la perméabilité. Les in vitro Le score d'irritation, obtenu en combinant ces deux paramètres, sert à déterminer la classification de la substance dans le SGH.

Le défi le plus courant que nous rencontrons lors du test BCOP dans notre laboratoire est le maintien de la fraîcheur des échantillons cornéens. Les yeux obtenus de l'abattoir doivent être livrés au laboratoire dans les quatre premières heures suivant l'abattage, et les cornées doivent être isolées et préparées pour être testées dans ce délai. En raison de cette exigence logistique, nous ne planifions le test BCOP que sur des jours précis et nous coordonnons à l'avance avec l'abattoir. De plus, bien que les cornées bovines présentent une forte similitude structurelle avec les cornées humaines, les différences d'épaisseur de la cornée et le nombre de couches épithéliales peuvent conduire à des résultats faux négatifs avec certains réactifs sensibles. Dans de tels cas, nous améliorons la sensibilité en intégrant l'examen histopathologique.

L'avantage le plus important du BCOP est que, puisqu'il est obtenu en tant que sous-produit des abattoirs, il ne pose aucune préoccupation éthique. Il a été adopté par l'OCDE en 2009 et actualisé en 2013 et 2025. Cependant, le test ne mesure que les paramètres d'opacité et de perméabilité de la cornée; il ne peut pas modéliser des facteurs tels que le film de déchirure, la réponse immunitaire et la cicatrisation des tissus. Il peut être limité dans la prévision du risque de dommages oculaires graves résultant de mélanges complexes, tels que les formulations de pesticides.

OCDE TG 438: Test des yeux de poulet isolés (ICE)

OCDE TG 438 est un ex vivo test qui utilise les yeux obtenus à partir de poulets. Étant donné que les poulets sont abattus pour être consommés, le test n'exige pas l'utilisation d'animaux. Le principe de l'essai consiste à placer l'œil isolé dans un support et à appliquer la substance d'essai à la surface cornée. Les effets toxiques sont évalués en fonction de quatre paramètres : opacité de la cornée, lésions épithéliales (rétention de fluorescéine), augmentation de l'épaisseur de la cornée (gonflement) et lésions morphologiques macroscopiques.

Dans notre laboratoire d'application du test ICE, nous obtenons une grande précision, en particulier pour les surfactants et les produits de nettoyage à base d'alcool. L'année dernière, dans une étude ICE que nous avons menée pour un fabricant industriel de produits de nettoyage, nous avons identifié avec succès le produit potentiel de « dommages oculaires graves » (catégorie 1) et facilité la révision de la formulation par le fabricant. Ce cas est utile pour démontrer à quel point le test ICE est efficace, en particulier avec les surfactants.

Le test ICE a été adopté par l'OCDE en 2009 et actualisé en 2013 et 2025. Ses avantages les plus significatifs sont sa capacité à mesurer des paramètres physiques tels que le gonflement cornéen et le potentiel d'améliorer sa sensibilité par l'examen histopathologique. Cependant, comme le BCOP, le test ICE utilise uniquement ex vivo Il ne peut pas modéliser les interactions vasculaires et immunitaires.

OCDE TG 492: Essai d'épithélium humain reconstitué semblable à celui de la Corneal (RhCE)

OCDE TG 492 est un in vitro test qui utilise des modèles tissulaires tridimensionnels mimichant l'épithélium cornéen humain. Ces modèles sont des cultures de tissus dérivées de cellules épithéliales cornéennes humaines qui préservent la structure multicouche, la fonction de barrière et l'activité métabolique de l'épithélium cornéen. Le principe de l'essai consiste à appliquer la substance d'essai au tissu RhCE pendant une période donnée, puis à mesurer la viabilité cellulaire au moyen de l'essai MTT.

L'avantage le plus important du test RhCE est que, parce qu'il utilise des cellules humaines, il permet une extrapolation directe à la biologie humaine. Dans notre laboratoire, nous utilisons cette méthode comme test de dépistage primaire, particulièrement pour les produits cosmétiques et de soins personnels. Étant donné que les essais sur animaux sont interdits par le règlement de l'UE sur les cosmétiques, le RhCE est la seule option obligatoire pour ce secteur.

Cependant, le RhCE teste seulement l'épithélium cornéen superficiel; il ne peut pas évaluer les interactions avec des structures oculaires plus profondes, la dynamique de la pellicule déchirante ou la guérison tissulaire. De plus, le TG 492 ne peut faire qu'établir une distinction entre "N'exigeant pas une classification" et "Irritant"; il ne suffit pas à lui seul pour une classification "Dégâts oculaires graves" (catégorie 1). Par conséquent, nous recommandons d'effectuer des essais complémentaires avec BCOP ou ICE, en particulier pour les substances de catégorie 1.

Le tableau ci-dessous présente un résumé comparatif des principales caractéristiques des lignes directrices de l'OCDE sur les TG 437, TG 438 et TG 492.

Approches définies et stratégies d'essai intégrées

L'OCDE a développé Approches définies (DA) pour les cas où une seule in vitro test est insuffisant pour l'évaluation de l'irritation oculaire. Ces approches visent à réduire ou à éliminer complètement la nécessité de in vivo Draize test en combinant les résultats de différents in vitro essais. Cinq DA sont acceptées en vertu du TG 467 de l'OCDE : DA pour les liquides (DAL-1 et DAL-2), DA pour les solides (DAS) et DA pour les surfactants (DASF).

Dans notre laboratoire, nous appliquons ces DA, particulièrement pour les formulations complexes. Par exemple, l'an dernier, nous avons utilisé l'approche DAL-2 (BCOP + STE) pour un nouveau gel nettoyant pour le visage. Alors que le seul test RhCE a donné un résultat « non irritant », la combinaison DAL-2 a révélé le potentiel « légèrement irritant » du produit, ce qui nous a amenés à aider le fabricant à procéder à une révision mineure de la formulation. Ce cas démontre comment les stratégies d'essai intégrées fournissent des résultats plus fiables que les tests uniques.

Tests d'irritation oculaire dans notre laboratoire

Dans notre laboratoire certifié GLP, nous effectuons des tests d'irritation oculaire couverts par les TG 437, TG 438 et TG 492 de l'OCDE en pleine conformité avec les normes internationales. Nous utilisons des systèmes d'essai validés pour les trois méthodes; ex vivo des tests, nous fournissons des cornées bovines fraîches et des yeux de poulet, in vitro tests, nous utilisons des modèles RhCE validés.

Notre processus d'essai commence par une évaluation préliminaire complète. Les propriétés physicochimiques de la substance d'essai, la valeur du pH, la solubilité et la structure chimique sont examinées. Sur la base de cette information, la méthode d'essai ou la combinaison de méthodes d'essai la plus appropriée est déterminée. Les résultats des essais sont interprétés et communiqués conformément aux critères du SGH.

Un de nos principaux avantages de laboratoire est que nous offrons divers in vitro et ex vivo dans le cadre d'une stratégie intégrée. Pour un produit donné, le test de dépistage le plus approprié est effectué en premier; si les résultats ne sont pas concluants ou si l'autorité de réglementation le demande expressément, des tests supplémentaires ou des DA sont utilisés. Cette approche progressive garantit l'efficacité en termes de temps et de coûts.

Foire Aux Questions

L'une des questions les plus courantes que nous recevons au sujet du TG 437, 438 et 492 de l'OCDE est celle pour laquelle le test convient. Le TG 437 (BCOP) convient aux substances sous forme liquide, solide et pâteuse, ainsi qu'aux substances insolubles dans l'eau. Le TG 438 (ICE) est particulièrement idéal pour les surfactants, les alcools et les substances hydrosolubles. Le TG 492 (RhCE), par contre, est préféré pour les cosmétiques, les produits de soins personnels et les substances hydrosolubles. Notre laboratoire évalue les propriétés de la substance d'essai pour recommander la méthode la plus appropriée ou la combinaison DA.

In vitro Les résultats des tests sont souvent demandés s'ils peuvent remplacer in vivo essais. Oui, validé in vitro les essais et les combinaisons DA permettent une classification sans in vivo essais. L'OCDE et l'UE REACH reconnaissent ces in vitro des méthodes d'essais primaires. Toutefois, in vivo la validation peut être requise si les résultats des essais ne sont pas concluants ou si l'autorité de réglementation en fait expressément la demande.

En ce qui concerne la durée de l'essai, TG 437 et TG 492 donnent généralement des résultats en 1 à 2 semaines; TG 438, cependant, peut prendre 2 à 3 semaines en raison de l'obtention de tissus et des mesures de gonflement. La durée totale est de 3 à 5 semaines. Enfin, la question se pose de savoir pour quelles présentations réglementaires ces tests peuvent être utilisés. Les rapports TG 437, 438 et 492 sont valables pour EU REACH, le règlement CLP, la classification SGH, le règlement CE sur les cosmétiques et les exigences turques KKDIK.

Les méthodes in vitro et ex vivo d'évaluation de l'irritation oculaire constituent le fondement d'une approche moderne qui combine la précision scientifique et la responsabilité éthique. Avec nos tests, qui sont entièrement conformes aux normes OCDE TG 437, TG 438 et TG 492, nous évaluons le profil de sécurité oculaire de vos produits selon les normes scientifiques les plus élevées—sans avoir besoin d'essais sur les animaux. Notre laboratoire certifié GLP, équipé de modèles de tissus validés, d'une équipe expérimentée et de stratégies de test intégrées, est votre partenaire fiable pour tous vos besoins de test d'irritation oculaire. Contactez-nous pour démontrer votre sécurité oculaire produit.