OECD TG 442C / 442D / 442E: Cilt Sensitizasyonda 2o3 DA ve Vitro Alternatifleri ile Alan Deneyimi

Skin duyarlılık değerlendirme, kozmetik, farmasötik, pestisit ve tıbbi cihaz endüstrilerinde ürün güvenliğinin vazgeçilmez bir bileşenidir. Geleneksel olarak, bu değerlendirme, hayvan modellerinde testleri (LLNA, GPMT, Buehler); ancak 3R ilkeleri ve bilimsel ilerlemeleri ile paralel olarak, doğrulandı. chemico ve in vitro Yöntemler ön plana geldiler. Bu dönüşümün merkezinde, OECD TG 442C (DPRA), OECD TG 442D (KeratinoSensTM) ve OECD TG 442E (h-CLAT)Ayrıca, 2o3 Defined Approach (DA) Bu üç testi birleştirir.

Son iki yılda laboratuvarımızda yaptığımız cilt duyarlılık çalışmalarının önemli bir kısmı bu üç yıl boyunca bu üçünü içeriyordu. chemico/in vitro yöntemler. Özellikle, AB Kozmetik Yönetmeliği altındaki hayvan testlerine ilişkin tam yasak bu testleri üreticiler için zorunlu hale getirmiştir. Ancak, alan deneyimimiz, tüm üç testin kendi eşsiz güçlü ve zayıf yönleri olduğunu ve 2o3 DA'nın sadece doğru yorumlandığında güvenilir sonuçlar verdiğini gösteriyor.

OECD TG 442C (DPRA): Protein Bindinginin Chemico Analizi

OECD TG 442C Bir şeydir chemico İlk anahtar olayı hedeflemek (küresel duyarlılık AOP). Maddeler genellikle doğada elektrofilik ve cilt proteinlerinin nükleofilik kısımları ile uyumlu bağlar oluşturur (sistein ve lysinezu). DPRA, test maddesi ile peptid konsantrasyonundaki azalmayı modellemek için sentetik peptidler (bağlantı ve lysine) kullanır. [citation:2].

Laboratuvarda DPRA'yı yaparken karşılaştığımız en yaygın sorun, test maddenin çözünürlükidir. Protokol, test maddenin 100 mM'nin bir konsantrasyonunda çözülmesi gerektiğini belirtir; Bununla birlikte, bu her zaman lipofilik örnekler veya parçacıkları içerenler ile mümkün değildir. İngiltere REACH çerçevesi altında yapılan bir değerlendirmede, bazı maddelerin uygun bir çözücü eksikliği nedeniyle DPRA'da test edilemediğini ve bu durum hayvan testlerine geri dönmesine yol açtı. Çözümümüz, düşük çözünürlükli maddeler için "belirli" ve onları 2o3 DA'nın diğer bileşenleri ile birlikte değerlendirmektir. Ayrıca, DPRA, oxidative özelliklerini sergileyen metal bileşikler ve maddeler için uygun değildir; bu sınırlama, raporlarımızda açıkça belirtilmiştir [citation:8].

DPRA'nın en önemli avantajı, hızlı ve maliyetli olmasıdır; ancak, hassasiyet potansiyelini belirlemek için kendi başına yeterli değildir. Bu nedenle, 2o3 DA içinde bir bilgi kaynağı olarak kullanılır.

OECD TG 442D (KeratinoSensTM): Keratinosit aktivasyon ölçümü

OECD TG 442D Bir şeydir in vitro AOP'un ikinci anahtar etkinliğini hedeflemek (KE2). KeratinoSensTM, insan keratinosit hücre çizgisini (HaCaT) luciferase gen ile yaratan bir muhabir hücre hattıdır. Test maddeye 48 saatlik maruz kaldıktan sonra, Nrf2-ARE yolu aktivasyonu [citation:3][citation:15] tarafından ölçülmektedir.

Alan deneyimimizde KeratinoSensTM özellikle kozmetik hammaddelerle yüksek doğruluk gösterdi. Bununla birlikte, bir vaka dikkatimizi yakaladı: Bir bitki ekstra örneğinde, KeratinoSensTM sonucu "belirli" aralığında düştü ( 1.35- ve 1.67-kat arasındaki değeri). 2o3 DA yönergelerine göre, bu durumda diğer iki test (DPRA ve h-CLAT) tutarlı ve son derece güvenilir olmalıdır [citation:12]. DPRA testi negatifti, h-CLAT testi olumlu olsa da; bu tutarsızlık nedeniyle, 2o3 DA sonucu "belirli" olarak rapor edildi. Müşteriye bu ekstralığın hassasiyet potansiyelinin kesin olarak sınıflandırılmadığını ve bu ek bilgilerin (örneğin, kimyasal karakterizasyonu veya veya kimyasal karakterizasyonu veya veya kimyasal karakterizasyonu veya silico Modelleme) gerekliydi. Bu durum, 2o3 DA için "belirli" sonuçları doğru şekilde yorumlamanın ne kadar kritik olduğunu gösteriyor.

OECD TG 442E (h-CLAT): Dendritic Hücre Aktivasyonunun İncelenmesi

OECD TG 442E kapaklar in vitro AOP'un üçüncü anahtar etkinliğini hedef alan testler. Bu kılavuzda üç yöntem tanımlanır: h-CLAT, U-SENSTM ve IL-8 Luc. h-CLAT, CD54 ve CD86'nın bir insan monosit hücre hattında (THP-1) akış cytometrisi kullanarak artışı ölçer.

Laboratuvarda h-CLAT'ı yaparken düşündüğümüz en önemli nokta, Log P > 3.5 ile maddeler için olumsuz sonuçlar düşük güvenilirlike sahip olmasıdır [citation:12]. Bu, lipofilik maddeler hücre kültüründe yeterince çözülemez. Bir pestisitte aktif bir malzeme (bir Log P değeri 4.2 ile) h-CLAT'de olumsuz bir sonuç verdi; ancak bu sonucu kendi başına "nezleyici değil" olarak yorumlamadık. DPRA ve KeratinoSensTM sonuçları da 2o3 DA kapsamında kabul edildi ve her ikisi de olumlu olduğundan son sonuç "sensitizer" olarak rapor edildi. Bu, h-CLAT'ın neden izolasyonda kullanılmaması gerektiği konusunda somut bir örnek.

Aşağıdaki tablo, OECD TG 442C, 442D ve 442E yönergelerinin temel özelliklerini karşılaştırmalı bir özet sunar.

2o3 Defined Approach: Üç Testin Bütünleştirilmesi

2o3, DA, DPRA, KeratinoSensTM ve h-CLAT sonuçlarını birleştirerek hayvanların kullanımı olmadan deri hassasiyet potansiyelini belirlemeyi amaçlamaktadır. Bu yaklaşım altında, OECD TG 497 altında kabul edilen temel kural şu şekildedir: Üç testten en az ikisi olumluysa, madde bir "sensitizer" olarak sınıflandırılır; en azından iki olumsuzysa, "bir senatör değil" olarak sınıflandırılır. Bununla birlikte, sonuçlardan biri "belirli" aralığına girerse veya testlerin sınırlamaları oyuna girerse, DA sonucu "belirli" olabilir.

2o3 DA'yı laboratuvarımızda uyguladığımızda, her testin sonuçlarını ayrı olarak rapor ediyoruz ve rasyonelliğimizle birlikte son DA sonuç sunuyoruz. Örneğin, kozmetik bir koruyucu için, DPRA olumluydu, KeratinoSensTM olumluydu ve h-CLAT indeterminate aralığında düştü. DA için iki olumlu sonuç, maddenin bir "sensitizer" olduğunu sonucuna varmak için yeterliydi, ancak h-CLAT sonucu belirsizdi. Müşteriye bu maddenin GHS Kategori 1 olarak sınıflandırılması gerektiğini ve "Mayıs’un alerjik bir deri reaksiyonuna neden olabileceği" ifadesinin etiket üzerinde kullanılması gerektiğini bildirdik.

2o3 DA'nın en önemli avantajı, hayvanların kullanımını tamamen ortadan kaldırır ve düzenleyici yetkililer tarafından kabul edilir. Ancak, alan deneyimimiz, DA'nın "büyük" sonuçlarının doğru yorumunın kritik olduğunu gösteriyor. İngiltere REACH verilerine göre, bazı maddeler için, in vitro Testler, hayvan testlerine geri dönmenin yetersiz olduğunu kanıtlamıştır; birincil sebepler çözünürlük sorunları, UVCB maddeleri ve test sistemleri ile ilgili uygunlukları içerir [citation:5]. Bu nedenle, laboratuvarımız her çalışmadan önce test maddenin fizyolojik özelliklerini iyice değerlendiriyor ve 2o3 DA'nın önceden uygulanabilirliğini kanıtlıyor.

Laboratuvarlarımızda 2o3 DA ve Alan Gözlemlerinin Uygulanması

GLP sertifikalı laboratuvarımızda, OECD TG 442C, 442D ve 442E tarafından yapılan testler için 2o3 DA çerçevesi altında entegre test sunuyoruz. Test sürecimiz kapsamlı bir ön değerlendirme ile başlar: test malzemesinin çözünürlük, lipofiliklik (Log P), kimyasal sınıf ve potansiyel müdahaleler incelenir. Bu bilgilere dayanarak, 2o3 DA'nın uygulanabilirliği ile ilgili bir karar yapılır.

Son iki yılda 2o3 DA'yı kullanarak değerlendirdiğimiz alanlar, kozmetik koruyucular, bitki ekstraları, zararlı ilaçlarda aktif malzemeler ve tıbbi cihazlar çıkarlar içerir. Yüzümüzdeki en yaygın zorluk, bitki ekstraları gibi karmaşık karışımları test etmektir. DPRA ve KeratinoSensTM gibi testler karmaşık karışımlar için sınırlı bilgi sağlar; böyle durumlarda, en uygun yaklaşım sonuçları "belirli" olarak bildirmek ve müşteriye daha fazla bilgi sunmaktır (e.g., kimyasal karakterizasyon veya silico modelleme).

Alandan başka bir gözlem, 2o3 DA'yı tıbbi cihaz ekstralarına uygulama zorluğudur. ISO 10993-10: tıbbi cihazlar için standart GPMT, Buehler veya LLNA hassasiyet değerlendirme için belirtir; ancak, 2o3 DA her zaman cihaz ekstralarının karmaşıklığı nedeniyle uygun olmayabilir. Böyle durumlarda, müşteri ile en uygun test stratejisini belirlemek ve gerektiğinde, aynı zamanda gerekli olanı değerlendirmek için çalışıyoruz. in vivo Test seçeneği.

Sık Sorulan Sorular

OECD TG 442C, 442D ve 442E ile ilgili aldığımız en yaygın sorulardan biri, 2o3 DA'nın tek başına yeterli olup olmadığıdır. Cevap, test maddenin özelliklerine bağlıdır. İyi çözünürlükte olan maddeler için, metal içeriği ve 3.5, 2o3 DA'ün altındaki bir Log P değeri genellikle yeterlidir. Bununla birlikte, çözünürlük sorunları olan maddeler için, UVCB maddeler veya karmaşık karışımlar, DA "belirli" bir sonuç verebilir; bu tür durumlarda ek bilgi gereklidir.

Test süresine gelince, üç testin toplam süresi genellikle 3-4 haftadır ( raporlama dahil). DPRA 1 hafta sürer, KeratinoSensTM 2 hafta alır ve h-CLAT 2-3 hafta alır; ancak testler paralel olarak yapılabilir, toplam süre azalır. Hangi testin hangi madde için uygun olduğu için, DPRA özellikle yüksek protein reaktivitesi ile maddeler için bilgi sağlar, KeratinoSensTM, keratinosit aktivasyon gösteren maddeler için ve h-CLAT, infetik hücreleri aktive etmek için potansiyele sahiptir. Ancak, izolasyonda kullanılmamalıdır, ancak 2o3 DA'nın bir parçası olarak.

Deri duyarlılık değerlendirmesinde, 2o3 DA, hayvanların kullanımını ortadan kaldıran modern bir yaklaşımdır ve düzenleyici yetkililer tarafından tanınır. Testlerimiz, OECD TG 442C, 442D ve 442E standartları ile tamamen uyumludur, ürünlerimizin en yüksek bilimsel standartlara göre optimize potansiyelini değerlendiriyoruz. GLP sertifikalı laboratuvarımız, doğrulanmış test sistemleri, deneyimli personel ve alan uzmanlığı ile, cilt duyarlılık test ihtiyaçlarınız için güvenilir ortağınızdır. Ürüninizin hassasiyet profilini göstermek için, bizimle iletişime geçin.