OECD TG 442C / 442D / 442E: Field Experience with 2o3 DA and In Vitro Alternatives in Skin Sensitization

ويعد تقييم التوعية الجلدية عنصرا لا غنى عنه من عناصر سلامة المنتجات في صناعات التجميل والصيدلة ومبيدات الآفات والأجهزة الطبية. وتقليدياً، أجري هذا التقييم باستخدام اختبارات على نماذج الحيوانات (LNA، GPMT، Buehler)؛ غير أنه تم التحقق من صحتها، تمشياً مع مبادئ 3R والتقدم العلمي. in chemico و in vitro الأساليب وصلت إلى المقدمة في مركز هذا التحول OECD TG 442C (DPRA), OECD TG 442D (KeratinoSensTM) و OECD TG 442E (h-CLAT)مع النهج المحدد 2o3 هذا يجمع بين هذه الاختبارات الثلاثة

جزء كبير من دراسات التوعية الجلدية التي أجريناها في مختبرنا خلال السنتين الماضيتين in chemico/in vitro طرق In particular, the complete ban on animal testing under the EU Cosmetics Regulation has made these tests mandatory for manufacturers. غير أن تجربتنا الميدانية تبين أن الاختبارات الثلاثة لها مواطن القوة والضعف الفريدة الخاصة بها، وأن الـ 2o3 DA لا تحقق نتائج موثوقة إلا عندما تفسر تفسيرا صحيحا.

OECD TG 442C (DPRA): In Chemico Measurement of Protein Binding

OECD TG 442C هو in chemico اختبار يستهدف أول حدث رئيسي (KE1) من برنامج حساسية الجلد. وعادة ما تكون المواد المستشعرة هي مادة كهربية في طبيعتها وتشكل روابط متزامنة مع الأجزاء النواة من بروتينات الجلد (مخلفات السيستين والليسين). وتستخدم إدارة الموارد البشرية البتيدات الاصطناعية (المحتوية على الكيستين والليسين) لنموذج رد الفعل هذا، وتقيس الانخفاض في تركيز الباتيد عن طريق شركة HPLC في أعقاب احتضان مادة الاختبار [التحريض:1] [التحريض:2].

والقضية الأكثر شيوعاً التي نواجهها عند أدائنا لإدارة الموارد البشرية في مختبرنا هي مرونة مادة الاختبار. The protocol specifies that the test substance should be soluble at a concentration of 100 mM; however, this is not always possible with lipophilic samples or those containing particles. In an assessment conducted under the UK REACH framework, it was reported that some substances could not be tested in DPRA due to the lack of a suitable solvent, and this situation led to a return to animal testing [citation:5]. حلّنا هو أن نبلغ عن النتيجة "غير محدد" للمواد ذات الذوبان المنخفض، وأن نُقيّمها مقترنة بالعناصر الأخرى لـ2o3 DA. وعلاوة على ذلك، فإن إدارة الموارد البشرية ليست مناسبة للمركبات المعدنية والمواد التي تظهر خصائص أوكسيدية؛ وهذا القيد مذكور بوضوح في تقاريرنا [التقصي: 8].

وتتمثل الميزة الأهم لإدارة الشؤون الاقتصادية والاجتماعية في أنها سريعة وفعالة من حيث التكلفة؛ غير أنه لا يكفي وحده لتحديد إمكانيات التوعية. ولذلك، يُستخدم كمصدر للمعلومات في إطار الـ 2o3.

OECD TG 442D (KeratinoSensTM): Measurement of Keratinocyte Activation

OECD TG 442D هو in vitro اختبار يستهدف الحدث الرئيسي الثاني (KE2) للملوثات العضوية الثابتة. KeratinoSensTM is a reporter cell line created by transfecting the human keratinocyte cell line (HaCaT) with the luciferase gene. Following 48-hour exposure to the test substance, activation of the Nrf2-ARE pathway is measured by luciferase induction [citation:3][citation:15].

وفي تجربتنا الميدانية، أظهر كيراتينوس صرافة عالية الدقة، لا سيما مع المواد الخام التجميلية. غير أن إحدى الحالات لفتت انتباهنا: ففي عينة من المستخرجات النباتية، وقعت نتيجة " كيرتينوسنسات " في نطاق " غير محدد " (القيمة القصوى بين 1.35 و 1.67 ضعفا). According to 2o3 DA guidelines, in this case, the other two tests (DPRA and h-CLAT) must be consistent and highly reliable [citation:12]. اختبار إدارة الموارد البشرية كان سلبياً، في حين أن اختبار h-CLAT كان إيجابياً، وبسبب هذا التناقض، تم الإبلاغ عن نتيجة الـ2o3 DA على أنها "غير محددة". وأبلغنا العميل بأن إمكانية التوعية بهذا المستخرج لا يمكن تصنيفها بصورة نهائية، وأن معلومات إضافية (مثل الوصف الكيميائي أو السمة الكيميائية). in silico ومن المطلوب وضع النماذج. هذه القضية تُظهر مدى حرجيتها أن تُفسّر بشكل صحيح نتائج "التصميم" لـ2o3 DA.

OECD TG 442E (h-CLAT): Measurement of Dendritic Cell Activation

OECD TG 442E الأغطية in vitro الاختبارات التي تستهدف الحدث الرئيسي الثالث (KE3) للملوثات العضوية الثابتة. وتُعرَّف ثلاثة أساليب في هذا المبدأ التوجيهي: h-CLAT, U-SENSTM, and IL-8 Luc. h-CLAT measures the increase in the expression of the surface markers CD54 and CD86 in a human monocyte cell line (THP-1) using flow cytometry [citation:4] [citation:10].

وأهم نقطة نعتبرها عند أدائنا لـ (H-CLAT) في مختبرنا هي أن النتائج السلبية للمواد ذات الـ (Lg P . 3.5) ذات موثوقية منخفضة [التلقيح: 12]. ويُعزى ذلك إلى عدم تحلل المواد السحائية بما فيه الكفاية في وسط ثقافة الخلايا. A active ingredient in a pesticide (with a Log P value of 4.2) yielded a negative result in the h-CLAT; however, we did not interpret this result on its own as "not a sensitizer." وتم أيضاً النظر في نتائج إدارة الموارد البشرية وشركة كيراتينو للاستشعار في نطاق 2o3 DA، وبما أن كلاهما كانا إيجابيين، فقد أُبلغ عن النتيجة النهائية على أنها "معالجة". This is a concrete example of why h-CLAT should not be used in isolation.

ويقدم الجدول الوارد أدناه موجزا مقارنا للملامح الرئيسية للمجموعة 442 جيم، و 442 دال، والمبادئ التوجيهية 442 هاء.

2o3 Defined Approach: Integrated Interpretation of Three Tests

2o3 aims to determine skin sensitization potential without the use of animals by combining DA, DPRA, KeratinoSensTM, and h-CLAT results. وفي إطار هذا النهج، تم قبوله في إطار مجموعة التعاون التقني 497 التابعة لمنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي، تتمثل القاعدة الأساسية فيما يلي: إذا كان على الأقل اختبارين من الاختبارات الثلاثة إيجابيين، المادة تصنف على أنها "معالجة"؛ إذا كان اثنان على الأقل سلبيين، فإنه يصنف على أنه "ليس حساس". على أي حال، إذا كان أحد النتائج يقع ضمن نطاق "غير محدد" أو إذا كانت قيود الاختبارات قد بدأت،

عند تطبيق الـ2o3 DA في مختبرنا، نبلغ نتائج كل اختبار على حدة ونعرض النتيجة النهائية لـ DA جنبا إلى جنب مع أساسنا المنطقي. For example, for a cosmetic preservative, the DPRA was positive, the KeratinoSensTM was positive, and the h-CLAT fell within the indeterminate range. وكانت النتيجة الايجابية كافية لكي يخلص المدعي العام الى أن المادة كانت "حساسية" على الرغم من أن نتيجة h-CLAT لم تحدد. أبلغنا العميل أن هذه المادة يجب أن تصنف على أنها من الفئة 1 من النظام العالمي للأمن العام وأن بيان "ربما يسبب تفاعلاً حساساً على الجلد" يجب أن يستخدم على البطاقة

The most significant advantage of the 2o3 DA is that it completely eliminates the use of animals and is accepted by regulatory authorities. بيد أن خبرتنا الميدانية تبين أن التفسير الصحيح لنتائج " الغموض " للنائب العام أمر بالغ الأهمية. According to UK REACH data, for some substances, in vitro وقد ثبت أن الاختبارات غير كافية، مما أدى إلى العودة إلى اختبارات الحيوانات؛ وتشمل الأسباب الرئيسية مسائل القابلية للذوبان، ومواد ثنائي الفينيل متعدد الكلور، وعدم التوافق مع نظم الاختبار [الضغط: 5]. ولهذا السبب، يقيّم مختبرنا تقييماً دقيقاً الخواص الفيزيائية الكيميائية لمادة الاختبار قبل كل دراسة ويتحقق مسبقاً من إمكانية تطبيق المادة 2o3 من الحمض النووي.

تطبيق المادة 2o3 من القانون الجنائي والمراقبة الميدانية في مختبرنا

وفي مختبرنا المصدق على مشروع GLP، نعرض اختباراً متكاملاً في إطار الـ 2o3 DA للاختبارات التي تغطيها منظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي TG 442C و 442D و 442E. وتبدأ عملية اختبارنا بتقييم أولي شامل: تذوب المادة الاختبارية، والخصوبة السائلة، والصنف الكيميائي، والتدخلات المحتملة. واستناداً إلى هذه المعلومات، يُتخذ قرار بشأن انطباق قانون مكافحة الفساد على المادة 2o3.

وتشمل المواد التي قيّمناها باستخدام الـ 2o3 DA على مدى السنتين الماضيتين المحافظات التجميلية، والمستخرجات النباتية، والمكونات النشطة في مبيدات الآفات، ومستخرجات الأجهزة الطبية. والتحدي الأكثر شيوعا الذي نواجهه هو اختبار المخلوطات المعقدة، مثل مستخرجات النباتات. وتوفر اختبارات من قبيل " DPRA " و " KeratinoSensTM " معلومات محدودة عن الخلائط المعقدة؛ وفي هذه الحالات، يكون النهج الأنسب هو الإبلاغ عن النتائج على أنها " غير محددة " والتوصية بمعلومات إضافية للزبون (مثل الوصف الكيميائي أو السمة الكيميائية). in silico النموذج.

وثمة ملاحظة أخرى من الميدان تتمثل في صعوبة تطبيق المادة 2o3 DA على مستخرجات الأجهزة الطبية. The ISO 10993-10:2021 standard for medical devices specifies GPMT, Buehler, or LLNA for sensitization assessment; however, 2o3 DA may not always be suitable due to the complexity of devices extracts. وفي هذه الحالات، نعمل مع العميل لتحديد أنسب استراتيجية للاختبار، وعند الاقتضاء، نقيم أيضا in vivo خيار الاختبار

الأسئلة الشائعة

ومن أكثر الأسئلة شيوعاً التي نتلقىها فيما يتعلق بالوثيقة TG 442C، و442D، و442E ما إذا كانت المادة 2o3 تكفي وحدها. الجواب يعتمد على خصائص مادة الاختبار أما بالنسبة للمواد ذات الذوبان الجيد، فلا يوجد محتوى معدني، وقيمة لونغ بي أقل من 3.5, 2o3 DA، فهي كافية عموما. ومع ذلك، بالنسبة للمواد التي لها مشاكل في القابلية للذوبان، أو مواد ثنائي الفينيل متعدد الكلور، أو المزيجات المعقدة، يمكن أن تسفر وكالة مكافحة المخدرات عن نتيجة " غير محددة " ؛ وفي هذه الحالات، يلزم تقديم معلومات إضافية.

وفيما يتعلق بمدة الاختبار، يبلغ إجمالي مدة الاختبارات الثلاثة عموما ٣-٤ أسابيع )بما في ذلك الإبلاغ(. The DPRA takes 1 week, KeratinoSensTM takes two weeks, and h-CLAT takes 2-3 weeks; however, since the tests can be conducted in parallel, the total duration is reduced. As for which test is suitable for which substance, the DPRA provides information specifically for substances with high protein reactivity, KeratinoSensTM for substances showing keratinocyte activation, and h-CLAT for substances with the potential to activate dendritic cells. غير أنه لا ينبغي استخدامها في العزلة وإنما كجزء من الـ 2o3 DA.

In skin sensitization assessment, the 2o3 DA is a modern approach that eliminates the use of animals and is recognized by regulatory authorities. ومع تطابق اختباراتنا توافقاً تاماً مع معايير منظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي 442C و442D و442E، نقيّم إمكانيات التوعية لمنتجاتك وفقاً لأعلى المعايير العلمية. مختبرنا المصدق عليه من قبل GLP، مع نظام اختباره المصادق عليه، موظفين ذوي خبرة، وخبرة ميدانية، هو شريكك الموثوق في تلبية احتياجات اختبار حساسية الجلد. ولإظهار صورة لتوعية منتجك، اتصل بنا.