Vitro Yöntemlerinde Kullanılan Cilt Korozyonunun Belirlenmesi

Kimyasallarla temasa geçebilecek en ciddi yerel toksik etki şüphesiz, korozyon olmadandır. Korozyon, necrosis, ülserasyon ve yara doku oluşumu ile karakterize edilen ciddi bir durumdur, ki bir madde cilt dokusuna geri dönemez hasara neden olur. GHS (Global olarak Harmonized System) kriterlerine göre en yüksek tehlike kategorisinde sınıflandırılan maddeler, kullanıcı güvenliği için kabul edilemez bir risk oluşturur. Bu nedenle, doğru ve güvenilir yöntemleri kullanarak korozyon potansiyelini belirlemek hem yasal bir zorunluluk hem de etik bir sorumluluktur. OECD TG 431 ve OECD TG 430 İki birincil in vitro Bu değerlendirmede kullanılan test yönergeleri. Laboratuvarlarımız GLP ilkeleri altında her iki yönergeye uygun olarak testleri yapar, doğrulanmış doku modellerini kullanarak.

Bilimsel Basis ve Cilt Korozyonunun Önemi

Skin korozyon epidermis ve dermis’e deri ile temasa geçen bir maddenin sonucu olarak gelen geri dönüşümlü hasardır. Bu hasar sonuçları kimyasal yansır, doku necrosis, ülserasyon ve yara oluşumu. Corrosive maddeler tipik olarak güçlü asitlerdir (pH ≤2) veya güçlü üsler (pH ≥11.5) ve hızla deri bariyerini yok eder. Bununla birlikte, sadece pH değeri korozyon potansiyelini belirlemek için yeterli değildir; bazı maddeler nötr pH'da bile güçlü korratif etkiler gösterebilir. Bu nedenle, biyolojik test yöntemleri korozyon değerlendirme için gereklidir.

Korozyon testinin önemi, yalnızca sınıflandırma ve etiketleme ile sınırlı değildir. Korrosif maddeler için gerekli güvenlik önlemleri diğer maddeler için daha katıdır. Bu maddeler özel depolama koşulları, kişisel koruyucu ekipman (kimyayayaya dayanıklı eldivenler, yüz koruyucu kıyafetler) ve acil duş ve göz yıkama istasyonları gibi ek önlemler gerektirir. Ayrıca, kororatif maddelerin taşınması ve kullanımı belirli düzenlemelere tabidir. Bu nedenle, korozyon potansiyelinin doğru kararlılığı, mesleki sağlık ve güvenlik uygulamalarının temelini oluşturur.

Geçmişte, korozyon değerlendirme sadece kullanılarak yapıldı in vivo Hayvan testleri (OECD TG 404). Ancak, bu testler önemli hayvan acılarına neden olduğundan, in vitro 3R ilkelerine uygun olarak alternatifler geliştirildi. OECD TG 430 ve TG 431 bu alternatiflerin en yaygın kullanılanlarıdır ve doğrulanmış yöntemler olarak uluslararası tanınır. Bu yöntemler, korozyon potansiyelinin güvenilir kararlılığını garanti ederken hayvanların kullanımını tamamen ortadan kaldırır.

OECD TG 431: İnsan Epidermis (RhE) Korozyon Testi (RhE)

OECD TG 431 Bir şeydir in vitro Kimyasal maddelerin deri korozyon potansiyelini değerlendirmek için kullanılan insan epidermis (RhE) modellerini yeniden formüle etmeye dayalı test rehberi. Bu kılavuz 2004 yılında kabul edildi ve 2015 ve 2019'da güncellendi. TG 431 altında, test maddenin kororatif potansiyeli doğrulamalı RhE modelleri (EpiSkinTM, EpiDermTM, SkinEthicTM RHE, LabCyte EPI-MODEL24 vb.) kullanılarak değerlendirilir. Bu modeller, epidermis, lipid bariyer ve metabolik aktiviteyi koruyan insan keratinositlerinden elde edilen üç boyutlu doku kültürüdür.

TG 431 testinin temel prensibi, belirli bir süre için RhE dokusunun test maddesini uygulamaktır (tipik olarak 3 dakika veya 1 saat) ve sonra MTT assay kullanarak hücre viability ölçmek. MTT assay, MTT tetrazolium tuzunun, canlı hücrelerdeki Concordl dehidrojenaz enzimleri tarafından azaltıldığı ve onu mor renkli kristallere dönüştürme prensibine dayanmaktadır. Formazan kristalleri uygun bir çözücü ve ölçülmüş spektrfofofofofofofotometrik olarak çözülür. Hücre viability oranı negatif bir kontrol ile karşılaştırılarak hesaplanır. Hücre viability belirli bir eş değerin altında düşerse (tipik olarak yüzde 50), madde "korrosif" olarak sınıflandırılır.

TG 431'in en önemli özelliği, korozyon potansiyelinin doğrudan ve güvenilir bir kararlılığa olanak sağlamaktır. Test sonuçları bir maddeyi "Skin Corrosive" olarak sınıflandırmak için kullanılabilir (Kategory 1) veya GHS kriterlerine göre "Siyasi olmayan". TG 431, özellikle güçlü asitler, güçlü üsler, endüstriyel temizlik ajanları, lime removers ve bazı pestisitler için yaygın olarak kullanılır. Ayrıca EU REACH Yönetmeliği altında korozyon değerlendirme için birincil yöntem olarak da kabul edilir.

OECD TG 430: Transcutaneous Elektrik Direnişi (TER)

OECD TG 430 Başka bir şeydir in vitro Test rehberi kimyasal maddelerin deri korozyon potansiyelini değerlendirmek için kullanılır. Bu kılavuz 2004 yılında kabul edildi ve 2015 yılında güncellendi. TG 430 bir şeydir ex vivo bovine veya insan derisi kullanarak yapılan test ve temel prensibi, test maddenin elektrik direnci üzerindeki etkisini ölçmeyi içerir (Transcutaneous Elektrik Direnişi - TER) deri örnekleri. Corrosive maddeler cilt bariyerine zarar verir, böylece elektrik direncini azaltır; bu azalma, maddenin kororatif potansiyelinin bir göstergesidir.

TG 430 testinde, deri örnekleri iki-kompartment diffüzyon hücresine yerleştirilir ve test materyali bir deri yüzeyine uygulanır. Deriden geçen elektrik akımı elektrotlar ile ölçülür ve direnç değeri hesaplanır. Eğer direnç değeri test maddenin uygulanmasından sonra belirli bir eşin altında kalırsa, madde "korrosive" olarak sınıflandırılır. TG 430 özellikle aşırı uçlardaki pH değerleri ile su kaynaklı maddeler ve maddeler için uygundur.

TG 430'un en önemli avantajı, insan veya bovine derisinin gerçek bariyer özelliklerini kullandığıdır. Bu, sonuçları insan derisine ekpolasyonunu güçlendiriyor. Bununla birlikte, test yapmak için taze deri örneklerine ihtiyaç ve testin daha teknik karmaşıklığı bazı laboratuvarlar için sınırlı faktörler olabilir. Ek olarak, TG 430 sadece korozyon potansiyelini değerlendirmektedir; ayrı testler (OECD TG 439) tahriş potansiyeli için gereklidir.

Aşağıdaki tablo, OECD TG 431 ve TG 430 yönergelerinin temel özelliklerinin karşılaştırmalı bir özeti sunar.

TG 431 ve TG 430'un avantajları ve sınırları

Her ikisinin de en önemli avantajı in vitro Korozyon testleri, hayvanların kullanımını tamamen ortadan kaldırarak 3R'lerin "Replacement" prensibine tamamen uymalarıdır. Ayrıca, bu testler daha hızlı, daha ekonomik ve daha fazla reroducible sonuçlar karşılaştırılabilir in vivo Testler. Etik komite onay süreçlerini basitleştirir ve hayvan acısını ortadan kaldırırlar. Bu alternatiflerin önemi, yüksek korrosif maddelerin değerlendirilmesinde daha da artmaktadır.—Güçlü asitler ve üsler gibi—Ağır acıya neden oldu in vivo Testler.

TG 431'nin en önemli avantajı, insan hücrelerinden elde edilen RhE modellerinin kullanımıdır; bu, sonuçların insan biyolojisine doğrudan ekpolasyonunu sağlar. Ayrıca, test maddenin fiziksel şekline bakılmaksızın uygulanabilir (liquid, sağlam, sal) ve ayrıca su kaynaklı maddeler için de uygundur. TG 430'un diğer yandan, gerçek bir deri bariyerini kullandığı ve özellikle su kaynaklı maddeler ve spektrumun aşırı uçlarında pH değerleri olan kişiler için yüksek doğruluk sağlar. bovine derisi, kathanelerin ürünü olarak elde edildiğinden, herhangi bir etik endişe yaratmaz.

Bununla birlikte, her iki test de bazı sınırlamalara sahiptir. TG 431 tamamen dermal etkileşimleri modelleyemez çünkü RhE modelleri sadece epidermal tabakadan oluşur. Ek olarak, bazı test maddeleri (örneğin, güçlü renkli maddeler) MTT assay'da müdahaleye neden olabilir; böyle durumlarda ek kontroller gereklidir. TG 430, diğer yandan, lojistik zorluklar ve yenidenrodite ile sorunlar yaratabilecek taze deri örnekleri gerektirir. Ayrıca, TG 430 sadece su kaynaklı maddeler için uygundur; su kaynaklı maddeler için TG 431 tercih edilmelidir. Bu sınırlamaların farkında, laboratuvarımız her ürün için test stratejisini özelleştirmektedir ve gerektiğinde tamamlayıcı analizler sunar.

Stepif Test Stratejisi ve Uygulamasını Laboratuarımızda

OECD, korozyon değerlendirme için bir adımlı test stratejisi öneriyor.
İlk aşamada, mevcut veriler, pH ölçümleri ve yapı-aktivite ilişkileri analizleri değerlendirilir. Bir pH ≤ 2 veya ≥ 11.5 ile substances doğrudan "Skin Corrosive" (Kategory 1) ve bir pH ≤ 2 veya ≥ 11.5 ile sınıflandırılmıştır. in vitro Test gerekli değildir. İkinci aşamada, TG 430 veya TG 431 in vitro Testler yapılır. Bu testler maddenin korrosive olduğunu gösterirse, in vivo Test gerekli değildir. Test sonuçları negatiftir (as korrosive değildir), OECD TG 439 (RhE tahriş testi) tahriş potansiyelini değerlendirmek için yapılır. Bu adımlı yaklaşım, gereksiz hayvanın kullanımının önlenmesi sırasında bilimsel geçerliliği sağlar.

GLP sertifikalı laboratuvarımızda, uluslararası standartlara tam uyum içinde hem OECD TG 431 hem de TG 430 altında korozyon testleri yapıyoruz. TG 431 için, RhE modellerini (EpiSkinTM, EpiDermTM, SkinEthicTM); TG 430 için test yapmak için taze bovine deri örneklerini kaynaklıyoruz. Test sürecimiz kapsamlı bir ön değerlendirme ile başlar, test maddenin fizyolojik özellikleri, pH değeri, çözünürlük ve kimyasal yapı incelenir. Bu bilgilere dayanarak, en uygun test yöntemi belirlenir.

Test sonuçları GHS kriterlerine göre yorumlanır ve madde "Skin Corrosive" (Kategory 1) veya "Not Corrosive" olarak sınıflandırılır. Raporlarımız test yöntemi, doku modeli veya cilt örneği, maruz kalma süresi, hücre geçirgenliği veya direniş değerleri ile negatif ve pozitif kontrol sonuçları ve bir yorum bölümü hakkında ayrıntılar içerir. OECD şablonu ile uyumlu kapsamlı çalışma raporları, AB REACH, CLP Yönetmeliği, GHS ve diğer düzenleyici çerçevelerle tanışır.

Laboratuvarlarımızın önemli avantajlarından biri, entegre bir stratejinin parçası olarak korozyon ve tahriş testleri sunuyoruz. A'nın korozyon potansiyeli (TG 430 veya TG 431) ilk olarak değerlendirilir; eğer madde uygun değilse, onun tahriş potansiyeli (TG 439) daha sonra test edilir. Bu entegre yaklaşım hem zaman hem de maliyet açısından verimlilik sağlar ve düzenleyici gönderimler için kapsamlı bir veri paketi oluşturur.

Sık Sorulan Sorular

OECD TG 431 ve TG 430 ile ilgili aldığımız en yaygın sorulardan biri hangi madde için uygun. TG 431 sıvı, sağlam ve sallanan formlarda maddeler için uygundur, ayrıca su kaynaklı maddeler. TG 430, diğer yandan, su kaynaklı maddeler ve ölçeğin aşırı uçlarında pH değerleri ile idealdir. Laboratuvarlarımız test maddenin özelliklerini değerlendirir ve en uygun yöntemi önerir.

Biz de sık sık sık bir an önce sorulduk in vitro Aşırı bir pH değeri olan bir madde için korozyon testi gereklidir. Bir pH ≤2 veya ≥11.5 ile alt alanlar doğrudan "Skin Corrosive" olarak sınıflandırılır (Kategory 1) OECD TG 430 veya TG 431. Bu yaklaşım, gereksiz testleri önlemek için OECD tarafından görevlendirilmiştir.

Ayrıca genellikle in vitro korozyon testi sonuçları değiştirebilir in vivo Testler. Evet, TG 430 ve TG 431 testleri, gerek kalmadan korozyon sınıflandırmasına izin verir in vivo Test. OECD ve EU REACH, bunları tanır in vitro birincil testler olarak yöntemler. Bununla birlikte, test sonuçları kesin veya düzenleyici otorite özellikle talep ederse, in vivo Geçerlilik gerekli olabilir.

Test süresine gelince, TG 431 genellikle 1-2 hafta içinde sonuçlar verir; TG 430, ancak cilt örnekleri ve direnç stabilizasyonu nedeniyle 2-3 hafta sürebilir. Raporlama ve kalite güvencesi incelemesi, toplam süre 3-5 haftadır. Son olarak, soru bu testlerin hangi düzenleyici teslimleri için kullanılabilir. TG 430 ve TG 431 raporları Avrupa Birliği için geçerlidir, CLP Yönetmeliği, GHS sınıflandırması, ABD EPA FIFRA ve Türk KKDIK gereksinimleri.

Skin korozyon, kimyasal maddelerin neden olabileceği en ciddi yerel toksik etkidir ve bu efekti doğru bir şekilde kullanıcı güvenliğinin temelini oluşturur. OECD TG 431 ve TG 430 standartları ile tam olarak uyumlu olan testlerimizle, ürünlerimizin en yüksek bilimsel standartlara göre korozyon potansiyelini değerlendiriyoruz ve hayvan testine gerek kalmadan. GLP sertifikalı laboratuvarımız, doğrulamalı RhE modelleri, taze deri örnekleri ve deneyimli bir ekip ile donatılmış, deri korozyon test ihtiyaçlarınız için güvenilir ortağınızdır. Ürününüzün cilt güvenliğini göstermek için, bizimle iletişime geçin.