利用维特罗方法确定皮肤腐蚀

皮肤与化学物质接触可引起最严重的局部毒性效应,无疑是腐蚀. 腐蚀是一种严重的疾病,其特点是坏死、溃烂和疤痕组织形成,其中一种物质会对皮肤组织造成不可逆转的损害。 根据全球统一制度(全球统一制度)标准划入最高危险类别的腐蚀性物质对用户安全构成不可接受的风险。 因此,使用准确可靠的方法确定腐蚀的可能性既是法律要求,也是道德责任。 经合组织 TG 431 和 经合组织 TG 430 是两个初级 试管 本评估中使用的试验准则。 我们的实验室使用经过验证的组织模型,根据GLP原则,按照两项准则进行测试。

皮肤腐蚀的科学基础和重要性

皮肤腐蚀是物质与皮肤相接触而给外皮和皮肤造成不可逆的损伤. 这种损害导致化学烧伤、组织坏死、溃烂和疤痕形成。 腐蚀性物质一般为强酸(pH ≤2)或强碱(pH ≥11.5)并迅速破坏皮肤屏障. 然而,光是pH值还不足以确定腐蚀的可能性;有些物质即使在中性pH值时也能表现出强烈的腐蚀作用. 因此,腐蚀评估需要经过验证的生物试验方法。

腐蚀测试的重要性不仅限于分类和标签。 腐蚀性物质所需的安全防范措施比其他物质要严格得多。 这些物质需要额外措施,如特殊储存条件、个人防护设备(防化手套、面罩、防护服)以及紧急淋浴和洗眼站等。 此外,腐蚀性物质的运输和处置须遵守具体条例。 因此,准确确定腐蚀的可能性是职业健康和安全做法的基础。

过去,对腐蚀进行评估时专门使用 阴道 动物试验(OECD TG 404)。 然而,由于这些测试造成了动物的重大痛苦, 试管 已根据3R原则开发了替代品。 经合组织TG 430和TG 431是这些替代品中最广泛使用的,被国际承认为有效的方法。 这些方法完全消除了动物的使用,同时确保可靠地确定腐蚀的可能性.

经合组织 TG 431:重新组成的人类传染病腐蚀试验

经合组织 TG 431 是一个 试管 试验准则,基于重新形成的人类外观模型,用于评估化学物质的皮肤腐蚀潜力。 该准则于2004年被通过并分别于2015年和2019年得到更新. 在TG 431下,使用经过验证的RhE模型(EpiSkinTM,EpiDermTM,SkinEthicTM RHE,LabCyte EPI-MODEL24等)来评价试验物质的腐蚀潜力. 这些模型是从人类的克赖特诺细胞中衍生出来的三维组织培养物,这些细胞保存了地表细胞的多层结构,脂质屏障和代谢活性.

TG 431试验的基本原则是将试验物质应用到RhE组织上一段时间(一般为3分或1小时),再用MTT测定来测量细胞的可行性. MTT测定是基于MTT四zo盐被活细胞中的线粒体脱氢酶酶还原而成紫色福马赞晶体的原则. 福马赞晶体被溶入合适的溶剂中并被分光测量. 与负控相比,计算出细胞存活率的百分比. 如果细胞活性低于一定阈值(一般为50%),该物质被归类为"腐蚀性".

TG 431最重要的特点是能直接可靠地确定腐蚀的可能性. 测试结果可用于按照全球统一制度标准将一种物质分类为"皮肤腐蚀"(第1类)或"非腐蚀". TG 431被广泛使用,特别是用于强酸,强碱,工业清洁剂,去石灰剂等某些农药. 它还被认为是欧盟REACH条例下的主要腐蚀评估方法.

经合组织 TG 430:外相电阻腐蚀试验

经合组织 TG 430 是另一个 试管 用于评估化学物质皮肤腐蚀可能性的试验准则。 该准则于2004年被通过并于2015年得到更新. TG 430是一个 前维沃 使用牛皮或人皮进行的试验,其基本原则是测量试验物质对皮肤样品电阻(直立电阻-TER)的影响。 腐蚀性物质会破坏皮肤屏障,从而降低电阻;这种下降是物质腐蚀性潜力的一个指标.

在TG 430试验中,将皮肤样品放入分两部分的分泌细胞中,试验物质被应用到皮肤的一个表面. 通过皮肤的电流通过电极进行测量,并计算出电阻值. 如果在试验物质被应用后电阻值会低于特定的阈值,则该物质被归类为"腐蚀性". TG 430特别适用于水溶性物质和具有pH值的物质,其分级极端.

TG 430的最显著优势在于它利用了人皮或牛皮的实际屏障特性. 这加强了结果对人皮的外推. 然而,对一些实验室来说,需要新鲜的皮肤样品来进行试验以及试验的技术更为复杂可能是限制因素。 此外,TG 430只评估腐蚀的可能性;刺激潜力需要单独测试(经合组织TG 439)。

下表提供了经合组织431和430技术赠款准则的主要特点比较摘要。

TG 431和TG 430的优点和局限性

两者最重要的优势 试管 腐蚀测试是指它们完全遵守3Rs的"取代"原则,完全消除了动物的使用. 此外,这些测试提供了更快、更经济、更可复制的结果,而相比之下, 阴道 测试。 它们简化了道德操守委员会的批准程序并消除了动物的痛苦。 在评估高腐蚀性物质时,这些替代品的重要性被进一步提高—如强酸和碱等—给人类带来的严重痛苦 阴道 测试。

TG 431最显著的优势在于它使用从人类细胞中衍生出来的RhE模型;这允许将结果直接外推到人类生物学. 此外,它不论试验物质的物理形式(液体、固体、粘贴)如何,都适用,而且适用于可溶于水的物质。 另一方面,TG 430的优点是它使用真皮屏障并提供了高精度,特别是对于可溶于水的物质和那些在光谱极端具有pH值的物质. 由于牛皮是作为屠宰场的副产品而得到的,因此不会引起任何伦理上的关切.

然而,这两项试验都有某些局限性。 TG 431无法完全建模皮肤相互作用,因为RhE模型只由表层组成. 此外,一些试验物质(如强色物质)可能会对MTT化验造成干扰;在这种情况下,需要额外的控制。 而TG 430则需要新鲜的皮肤样品,这可以产生可复制的后勤挑战和问题. 此外,TG 430只适用于可溶于水的物质;对于可溶于水的物质,TG 431应优先使用. 我们的实验室意识到这些局限性,定制了每种产品的测试战略,并在必要时提供补充分析。

逐步测试战略及其在我们实验室中的应用

经合组织建议采用分步测试方法进行腐蚀评估。
在第一阶段,对现有数据、pH值测量和结构活性关系分析进行评价。 pH值为2或11.5的物质直接被归类为"皮肤腐蚀"(第1类),并且 试管 不需要测试。 在第二阶段,TG 430或TG 431 试管 进行了测试。 如果这些试验表明该物质具有腐蚀性, 阴道 不需要测试。 如果试验结果为负(物质不是腐蚀性的),则进行OECD TG 439(RhE刺激性试验)来评估刺激潜力. 这种循序渐进的方法既能确保科学的有效性,又能防止动物不必要的使用.

在我们的GLP认证实验室,我们完全按照国际标准在经合组织TG 431和TG 430下进行腐蚀性测试。 对于TG 431,我们使用经过验证的RhE模型(EpiSkinTM,EpiDermTM,SkinEthicTM);对于TG 430,我们源出新鲜的牛皮样本来进行测试. 我们的测试过程从一个全面的初步评估开始,在此期间,测试物质的物理化学性质、pH值、可溶性和化学结构都受到检查。 根据这些信息,确定了最适当的测试方法。

测试结果按照GHS标准解释,该物质被分类为"皮肤腐蚀"(Category 1)或"非腐蚀". 我们的报告详细介绍了测试方法、组织模型或皮肤样本、接触时间、细胞活性或抗药性值,以及阴性和正性控制结果和解释部分。 符合经合组织模板的全面研究报告符合欧盟REACH、CLP条例、全球统一制度和其他监管框架的要求。

我们实验室的主要优势之一是,我们提供腐蚀和刺激测试,作为综合战略的一部分。 首先评估一种物质的腐蚀潜能值(TG 430或TG 431);如果该物质是非腐蚀性的,则测试其刺激潜能值(TG 439)。 这一综合办法在时间和成本方面都提供了效率,并为提交监管文件提供了一套综合数据。

常见问题

我们收到的关于经合组织TG 431和TG 430的最常见问题之一是哪种试验是适当的。 TG 431适用于液态,固态和粘贴态的物质以及可溶于水的物质. 另一方面,TG 430对于可溶于水的物质和那些具有pH值的量极小的物质来说是理想的. 我们的实验室评估试验物质的特性,并建议最适当的方法。

我们还经常被问到: 试管 对于具有极高pH值的物质,需要进行腐蚀试验。 编号:pH值为≤2或≥11.5的物质直接被划为"皮肤腐蚀"(第1类)而无需适用OECD TG 430或TG 431. 经合组织授权这一方法防止不必要的测试。

人们还常问体外 腐蚀测试结果可以替换 阴道 测试。 是,经过验证的TG 430和TG 431试验可以进行腐蚀分类,而不需要 阴道 测试。 经合组织和欧盟认识到这些 试管 方法作为初级测试。 但是,如果测试结果无定论,或者如果监管机构具体要求, 阴道 可能需要验证。

关于试验期限,431土耳其盾一般在1至2周内产生结果;但由于采购了皮肤样品并稳定了抗药性,430土耳其盾可能需要2至3周。 包括报告和质量保证审查在内,总期限为3至5周。 最后,问题是这些测试可用于何种监管提交材料。 TG 430和TG 431报告适用于欧盟REACH、CLP条例、GHS分类、美国环保局FIFRA和土耳其KKDIK要求。

皮肤腐蚀是化学物质可引起最严重的局部毒性效应,并准确确定这种效应构成用户安全的基础. 我们的试验完全符合经合组织的TG 431和TG 430标准,因此,我们按照最高科学标准评估你们产品的腐蚀潜力,而无需进行动物试验。 我们的GLP认证实验室,配备了经过验证的RHE模型,新鲜的皮肤样本,以及一个经验丰富的团队,是您在皮肤腐蚀测试需求方面的可靠合作伙伴. 为了展示您的产品皮肤安全,请联系我们。