OECD TG 439 ve ISO 10993-23: Cilt Irritation için Vitro Yöntemlerinin Yükselişi

Kimyasal ve tıbbi cihazlarla temasa geçen deri tahriş potansiyelini değerlendirmek hem kullanıcı güvenliği hem de düzenleyici uyum için vazgeçilmez bir gerekliliktir. Geçmişte bu değerlendirme sadece hayvan testleri, bilimsel ve etik ilerlemeler yoluyla yürütülmüş olsa da, in vitro Yöntemler tercih edilen yaklaşım haline gelir. Bu geçişteki iki önemli dönüm noktası, OECD TG 439 ve ISO 10993-23 standartlar. Laboratuvarlarımız hem GLP hem de GMP ilkelerine uygun olarak hem standartları uygular, doğrulanmış yeniden formüle edilmiş insan epidermis (RhE) modellerini kullanır.

Vitro Skin Irritation Testlerinin Bilimsel Basis

Skin tahrişi, genellikle bir maddenin ciltle temasından kaynaklanan yerel bir enflamatuar yanıttır. Klinik olarak, erythema (redness), edema (swelling), kuruluk, soyulma ve kaşıntı olarak ortaya çıkıyor. Geleneksel olarak in vivo Testler, bu yanıt bir tavşan modelinde görsel puanlama ile değerlendirilir; in vitro Diğer yandan, insan derisinin yapısal ve işlevsel özelliklerini taklit eden üç boyutlu doku modelleri kullanın. Bu modeller, epidermal tabakasının çok katmanlı yapısını koruyan insan keratinositlerinden elde edilen insan epidermis (RhE) dokularını yeniden oluşturur.

İn vitro'nın temel prensibi Deri tahriş testi, belirli bir süre için RhE dokuya testi uygulamak ve sonra hücre viability ölçmektir. Hücre viability MTT assay kullanılarak belirlenir; Bu test MTT tetrazolyum tuzunun canlı hücrelerdeki mikondriyal dehidrojenaz enzimleri tarafından azaltıldığı ve mor renkli kristallere dönüştürülmesi prensibine dayanmaktadır. Formazan kristalleri uygun bir çözücü ve ölçülmüş spektrfofofofofofofotometrik olarak çözülür. Hücre viability oranı negatif bir kontrol ile karşılaştırılarak hesaplanır. Hücre geçirgenliği belirli bir eş değerin altında düşerse (tipik olarak yüzde 50), madde "irritating" olarak sınıflandırılır.

Bu yaklaşımın en önemli avantajı, insan derisine doğrudan ekstrapolasyon sağlar. Hayvan ve insan derisi arasındaki yapısal ve fizyolojik farklılıklar, tahmin edilebilir gücü sınırlayabilir in vivo Testler. RhE modelleri doğrudan insan biyolojisini yansıttığı için, sonuçlar klinik gerçeklikle daha tutarlıdır. Ayrıca, hayvanların kullanımını tamamen ortadan kaldırarak, bu yöntemler 3R'lerin "Replacement" prensibine tam olarak uymaktır.

OECD TG 439: Vitro Skin Irritation Test for Chemical

OECD TG 439 Uluslararası olarak tanınan bir durumdur in vitro Test rehberi, kimyasal maddelerin ve karışımların deri tahriş potansiyelini değerlendirmek için gelişmiştir. Bu kılavuz 2015 yılında kabul edildi ve 2021 yılında güncellendi. TG 439 altında, test maddenin cilt tahriş potansiyeli doğrulamalı RhE modelleri (EpiSkinTM, EpiDermTM, SkinEthicTM RHE, LabCyte EPI-MODEL24 vb.) kullanılarak değerlendirilir. Test tek bir uygulama dönemi içerir (tipik olarak 15 dakika veya 4 saat) 42 saatlik bir kesinti süresi takip eder. Hücre viability MTT assay kullanılarak ölçülür ve sonuçlar olumsuz ve olumlu kontrollerle karşılaştırılır.

TG 439'un en önemli özelliği, GHS (Globally Harmonized System) sınıflandırması için yeterli verilere sahip olmasıdır. Test sonuçları bir maddeyi "Skin Irritant" olarak sınıflandırmak için kullanılabilir (Kategory 2) veya "Tahverensiz değil." Bununla birlikte, TG 439 sadece tahriş potansiyelini değerlendirmektedir; ayrı testler (OECD TG 430, 431 veya 435) korozyon potansiyelini değerlendirmek gerekir. TG 439, özellikle kozmetik ürünler, kişisel bakım ürünleri, temizlik ajanları ve endüstriyel kimyasallar için yaygın olarak kullanılır.

AB Kozmetik Yönetmeliği (EC 1223/2009), kozmetik ürünler için hayvan testleri ve malzemeleri tamamen yasaktır. Bu nedenle, TG 439 kozmetik endüstrisi için zorunlu bir test haline geldi. Ayrıca, EU REACH Yönetmeliği altında Ancak yöntemlerin kullanımı teşvik edilir ve hayvan testleri doğrulanmış alternatifler mevcut olduğu yasaktır. TG 439 bu düzenleyici çerçevede merkezi bir rol oynar.

ISO 10993-23: Tıbbi Cihazlar için Cilt Irritation Test

ISO 10993-23 Uluslararası standart deri tahriş testleri tıbbi cihazların biyokopatlanabilirliği değerlendirmesinin bir parçası olarak tanımlamaktır. Bu standart, başlangıçta ISO 10993-10'da dahil edilen tahriş testlerinin güncellenmiş bir versiyonudur, şimdi ayrı bir standart olarak kuruldu. ISO 10993-23, cihazdan elde edilen ekstraların etkilerini veya cihazın materyalinin kendisini en iyi tıbbi cihazın klinik kullanım senaryosunu yansıtan bir şekilde değerlendirir.

ISO 10993-23'in en önemli inovasyonu onun önceliğidir in vitro yöntemler.
Standart, cilt tahriş değerlendirme için ilk seçim olarak doğrulamalı RhE modellerinin kullanımını önerir. Bu modeller aynı prensipte OECD TG 439 olarak çalışır; ancak ISO 10993-23, Ekstraksiyon koşullarını ve örnek hazırlama protokolleri tıbbi cihazlara özel olarak tanımlar. Örneğin, ekstralar kutup (serum tipi) ve non-polar kullanılarak cihazdan hazırlanır ve ISO 10993-12 ile uygun olarak çözünebilir petrol) çözücüler, ekstraksiyon sıcaklıkları ve süresi cihazın klinik kullanımını yansıtacak şekilde belirlenir.

ISO 10993-23:2021 ve önceki sürümler arasındaki en önemli fark, yöntem seçimi test etmek için risk bazlı bir yaklaşım benimsemekte ve kullanımı üzerinde daha güçlü vurgulanmaktadır. in vitro yöntemler. Standart, kimyasal karakterizasyon verileri ve mevcut literatüre dayanarak, bazı durumlarda hayvan testi olmadan bir tahriş değerlendirme tamamlanabilir. Ayrıca, bunu kabul eder, ne zaman in vitro Yöntem uygun değildir veya sonuçlar kesindir, in vivo Deri tahriş testi ( tavşanlar veya insan gönüllüleri üzerinde test) alternatif olarak kullanılabilir.

Aşağıdaki tablo, OECD TG 439 ve ISO 10993-23 standartlarının temel özelliklerinin karşılaştırmalı bir özeti sunar.

RhE Modellerinin Avantajları ve Limitleri

Yeniden formüle edilmiş insan epidermis (RhE) modelleri, temelini oluşturur in vitro cilt tahriş testi. Bu modellerin en önemli avantajı, çok katmanlı yapısını, lipid bariyerini ve insan derisinin metabolik aktivitelerini korumak ve böylece maddeler test etmek için gerçekçi bir yanıt sağlamaktır. RhE dokular, bazal tabakadan koreositlere kadar farklılaştırılmış hücre tabakaları içerir; bu, deri ve epidermal yanıt yoluyla kimyasal penetrasyonun doğru modellemesine izin verir. Ayrıca, bu modeller ticari olarak mevcut olduğundan, standartlaştırılmış ve doğrulanmıştır, sonuçlar laboratuvarlarda yüksek reroditebilite göstermektedir.

RhE modellerinin bir diğer avantajı etik ve ekonomik yararlarıdır. Hayvanların kullanımını tamamen ortadan kaldırarak, 3R ilkelerine tamamen uymaya devam ederler; gün yerine test süresi (saatler), maliyetleri azaltırlar; ve etik komite onay süreçlerini basitleştirirler. Özellikle kozmetik endüstrisinde RhE modelleri, Avrupa'daki hayvan testlerine yönelik yasak nedeniyle tek zorunlu seçenektir.

Ancak, RhE modelleri de bazı sınırlamalara sahiptir. Bu modeller sadece epidermal tabakadan oluşur; dermis, kan gemileri, bağışıklık hücreleri ve sinir sonları gibi cildin diğer bileşenlerini içermezler. Bu nedenle, dermal-epidermal etkileşimleri, damar cevapları ve neurojenik inflamasyon gibi süreçler tamamen modellenemez. Ek olarak, bazı test maddeleri (örneğin, su kaynaklı katılar, güçlü asitler/bazlar) RhE modellerinde yanlış sonuçlar verebilir; bu tür durumlarda, ek değerlendirme veya değerlendirme veya veya başka durumlarda, ek değerlendirme veya veya değerlendirmede bulunabilir. in vivo Geçerlilik gerekli olabilir. Bu sınırlamaların farkında, laboratuvarımız her ürün için test stratejisini tertemiz eder ve gerektiğinde tamamlayıcı analizler sunar.

OECD TG 439 ve ISO 10993-23 Testleri Laboratuvarımızda Uygulanıyor

GLP- ve GMP sertifikalı laboratuvarımızda hem OECD TG 439 hem de ISO 10993-23 uluslararası standartlara tam uyum içinde deri tahriş testleri yapıyoruz. For in vitro Testler, doğrulamalı RhE modelleri (EpiSkinTM, EpiDermTM, SkinEthicTM); vakalarda biz in vivo Test kaçınılmazdır, deneyimli veterinerlerin ve toksikologların gözetiminde 3R ilkelerine tam uyum içinde çalışıyoruz.

Test sürecimiz kapsamlı bir ön değerlendirme ile başlar. Test maddenin fizyolojik özellikleri, çözünürlük, pH değeri ve kimyasal yapı incelenir. Tıbbi cihazlar için, cihazın malzeme bileşimi, üretim süreci, sterilizasyon yöntemi ve klinik kullanım senaryosu ayrıntılı olarak değerlendirilir. Bu bilgilere dayanarak, en uygun ekstraksiyon protokolü ve test yöntemi belirlenir.

RhE testinde, test malzemesi veya ekstrakt bir doku modeline uygulanır ve belirtilen bir incubasyon periyodundan sonra, hücre viability MTT'yi assay olarak ölçülmektedir. Sonuçlar, negatif ve pozitif kontrollerle karşılaştırarak yorumlanır. Yüzde 50'nin altındaki hücre viability ile altstances "irritants" olarak sınıflandırılır. Morpholojik değerlendirme sayısal verilere önemli bir tamamlayıcı olarak hizmet eder; doku bütünlüğü, hücre şekli ve tabaka yapısı bir mikroskop altında incelenir.

Laboratuvarlarımızın önemli avantajlarından biri, test sonuçlarının doğrudan düzenleyici önerilerinize entegre edilebilir olmasıdır. OECD TG 439 ile uyumlu raporlar EU REACH, CLP ve kozmetik düzenlemeler için geçerlidir. ISO 10993-23 ile uyumlu raporlar AB MDR (2017/745), FDA 510 (k) ve diğer tıbbi cihaz düzenlemeleri için kabul edilir. Ayrıca, her iki standart için, kimyasal karakterizasyon verileri, ekstraksiyon ayrıntıları, hücre viability sonuçları ve morfolojik gözlemler içeren kapsamlı raporlar sunuyoruz.

Sık Sorulan Sorular

OECD TG 439 ve ISO 10993-23 ile ilgili aldığımız en yaygın sorulardan biri, hangi ürün için standarttır. OECD TG 439 kimyasal maddeler, karışımlar, kozmetikler ve temizlik ürünleri için geçerlidir. ISO 10993-23, diğer yandan, özellikle tıbbi cihazlar ve biyomalzemeler için geliştirildi. Seçim ürün düzenleyici kategorinize bağlıdır; laboratuvarımız ürününüzün özelliklerini değerlendirecek ve en uygun standardı önerecektir.

In vitro Test sonuçları genellikle yerini değiştirip değiştirebilmeleri istenir in vivo Testler. Evet, birçok durumda yapabilirler. OECD TG 439 ve ISO 10993-23, sınıflandırmaya ihtiyaç duymadan izin veriyor in vivo Test, RhE modellerini doğrulayan sağlar. Ancak, test sonuçları kesinse, madde suda çözülüyor veya düzenleyici otorite özellikle talep ediyor, in vivo Geçerlilik gerekli olabilir.

RhE modellerinin hangi ticari markalarının mevcut olduğuna ve hangisinin tercih edilmesi gerektiğine de ilgi var. EpiSkinTM, EpiDermTM, SkinEthicTM RHE ve LabCyte EPI-MODEL24, OECD-validated ve uluslararası olarak tanınan RhE modelleridir. Model seçimi test maddenin özelliklerine ve laboratuvarın geçerliliği durumuna bağlıdır; tüm modeller benzer bir ilke üzerinde çalışır ve benzer sonuçlar sağlar.

Test süresine gelince, RhE testi genellikle 1-2 hafta içinde sonuçlar verir; raporlama ve kalite güvence incelemesi dahil olmak üzere toplam süre 3-4 haftadır. Eğer in vivo Geçerlilik gereklidir, bu süre 4-6 haftaya kadar uzatılabilir. Son olarak, soru bu testlerin hangi düzenleyici teslimleri için kullanılabilir. OECD TG 439 raporları AB REACH, CLP, kozmetik düzenlemeler ve GHS sınıflandırması için geçerlidir; ISO 10993-23 raporları AB MDR, FDA 510 (k) ve diğer tıbbi cihaz düzenlemeleri için geçerlidir.

Deri tahriş değerlendirme yöntemleri, bilimsel doğruluğu etik sorumlulukla birleştiren modern bir yaklaşımın temelini oluşturur. OECD TG 439 ve ISO 10993-23 standartları ile tam olarak uyumlu olan testlerimiz ile, ürünlerimizin cilt güvenliğini en yüksek bilimsel standartlara göre değerlendiriyoruz.—Hayvan testine gerek kalmadan. GLP- ve GMP sertifikalı laboratuvarımız, doğrulamalı RhE modelleri ve deneyimli bir ekiple donatılmış, cilt tahrişi ihtiyaçlarının güvenilir ortağınızdır. Ürününüzün cilt güvenliğini göstermek için, bizimle iletişime geçin.