OECD TG 439和ISO 10993-23:皮肤刺激维特罗方法的兴起

评估与化学品和医疗器械的接触可能造成皮肤刺激,是用户安全和遵守规章制度的不可或缺的要求。 虽然过去这项评估完全通过动物试验进行,但科学和道德方面的进步导致 试管 方法成为首选方法。 这一过渡的两个关键里程碑是: 经合组织 TG 439 和 ISO 10993-23号标准 标准。 我们的实验室根据GLP和GMP原则执行两项标准,使用经过验证的重新组合的人类外观模型。

维特罗皮肤刺激试验的科学基础

皮肤刺激是一种局部的,典型的可逆性炎症反应,由物质与皮肤相接而来. 临床上表现为红ma(红ness),水肿(栖息地),干燥,剥取,并发痒. 传统 阴道 测试,通过兔子模型的视觉分数来评价这种反应; 试管 另一方面,方法使用模仿人类皮肤的结构和功能特征的三维组织模型。 这些模型是由人类的克赖特诺细胞所衍生出的结构重组的人类顶部组织(RhE)来保存顶部层多层结构,脂质屏障和代谢活性.

体外活动的基本原则 皮肤刺激试验是将试验物质应用到RHE组织上一段时间,然后测量细胞的可行性. 细胞活性使用MTT测定法确定;这一测试是基于MTT 四zo盐被活细胞中的线粒体脱氢酶酶还原而成紫色的福马赞晶体的原则. 福马赞晶体被溶入合适的溶剂中并被分光测量. 与负控相比,计算出细胞存活率的百分比. 如果细胞活性低于一定阈值(一般为50%),该物质被归类为"刺激".

这种方法最显著的优势是它允许直接外推到人类皮肤上. 动物和人类皮肤在结构上和生理上的差异可以限制其预测力。 阴道 测试。 由于RhE模型直接反映了人类生物学,结果更符合临床现实. 此外,这些方法通过完全取消对动物的使用,完全符合"取而代之""3R"原则.

经合组织 TG 439: 化学品维特罗皮肤刺激试验

经合组织 TG 439 是一个国际公认的 试管 为评估化学物质和混合物的皮肤刺激潜力而制定的试验准则。 该准则于2015年被通过并被更新于2021年. 在TG 439下,使用经过验证的RhE模型(EpiSkinTM,EpiDermTM,SkinEthicTM RHE,LabCyte EPI-MODEL24等)来评价试验物质的皮肤刺激潜力. 测试涉及一个单一的应用期(一般为15分或4小时),然后是42小时的孵化期. 细胞生存能力通过MTT测定法来测量,结果通过对比阴性和正性控制来解释.

TG 439最重要的特点是它为全球统一制度(全球统一制度)分类提供了充足的数据。 试验结果可用于将一种物质分类为"皮肤刺激"(Category 2)或"不刺激". 然而,TG 439只评估刺激潜能;需要单独进行测试(OECD TG 430,431或435)来评估腐蚀潜能. TG 439被广泛使用,特别是用于化妆品产品,个人护理产品,清洁剂,和工业化学品.

根据欧盟化妆品条例(EC 1223/2009),完全禁止对化妆品及其成份进行动物检测. 因此,TG 439已经成为化妆品行业的强制性测试. 此外,根据欧盟条例 ,鼓励使用方法,并禁止在有有效替代品的情况下进行动物检测。 439土耳其盾在这一监管框架中发挥了核心作用。

ISO 10993-23: 医疗器械皮肤刺激试验

ISO 10993-23号标准 作为医疗器械生物相容性评估的一部分,界定皮肤刺激试验的国际标准。 这个标准是最初包含在ISO 10993-10中的刺激测试的更新版本,现在作为一个单独的标准被确立. ISO 10993-23以最能反映医疗器械临床使用情况的方式评价从设备或设备材料本身得到的提取物对皮肤的影响。

ISO 10993-23最重要的创新是其优先安排 试管 方法。 。 。
该标准建议使用经过验证的RhE模型作为皮肤刺激性评估的首选. 这些模型的运作原则与经合组织TG 439相同;然而,ISO 10993-23界定了提取条件和医疗器械特有的样品制备协议. 例如,从设备中提取物是按照ISO 10993-12使用极地(含血浆介质)和非极地(植物油)溶剂制备的;取出温度和取出时间被确定为反映设备临床用途.

ISO 10993-23:2021与以前版本最显著的区别在于它采用了基于风险的方法来测试方法的选择,并更强调使用 试管 方法。 。 。 该标准规定,根据化学特征数据和现有文献,在某些情况下无需动物检测即可完成刺激评估. 此外,它承认,当 试管 方法不适当或结果无定论, 阴道 皮肤刺激测试(patch test on rabbits或人类志愿者)可被作为替代品.

下表提供了经合组织TG 439和ISO 10993-23标准的主要特征的比较汇总.

RHE模型的优点和局限性

重组的人类外观模型构成核心 试管 皮肤刺激测试。 这些模型最显著的优势是它们保存了人类皮肤多层结构,脂质屏障和代谢活性,从而提供了对测试物质的现实反应. RHE组织包含从玄武质地层到角细胞层不等的分化细胞层;这使得通过皮肤和顶部反应对化学穿入进行精确的模型化. 此外,由于这些模型是商业上的、标准化的和经过验证的,结果显示各实验室的可复制性很高。

RhE模型的另一个优势是其伦理和经济利益. 通过完全取消对动物的使用,它们完全遵守了3R原则;它们缩短了测试时间(小时而不是天数);它们降低了成本;它们简化了道德委员会的批准程序. 特别是在化妆品行业,由于欧盟禁止动物试验,RhE模型是唯一的强制选择.

然而,RhE模型也有某些局限性. 这些模型仅由表层组成;它们不包括皮肤上的其他成分,如皮肤,血管,免疫细胞和神经末梢等. 因此,皮肤-胚胎相互作用、血管反应和神经致炎等过程不能完全建模。 此外,某些试验物质(如:可溶于水的固体、强酸/碱基等)可能会在RhE模型中产生不准确的结果;在这种情况下,可进行额外评价或 阴道 可能需要验证。 我们的实验室意识到这些局限性,对每种产品的测试战略进行了调整,并在必要时提供补充分析。

在我们的实验室实施经合组织TG 439和ISO 10993-23试验

在我们的GLP和GMP认证实验室中,我们完全按照国际标准在经合组织TG 439和ISO 10993-23下进行皮肤刺激测试。 为了体外 测试,我们使用经过验证的RhE模型(EpiSkinTM、EpiDermTM、SkinEthicTM); 阴道 在经验丰富的兽医和毒理学家的监督下,我们完全遵守3R原则。

我们的测试过程首先要进行全面的初步评估。 试验物质的物理化学性质、可溶性、pH值和化学结构都经过审查。 对于医疗器械,该器械的材料组成、制造过程、绝育方法和临床使用情况都得到详细评价。 根据这一信息,确定了最适当的提取规程和测试方法。

在RHE测试中,测试物质或提取物被应用到组织模型上,在指定的孵化期后,使用MTT测定法来测量细胞的可行性. 对结果的解释是将它们与消极和积极的控制相比较。 细胞存活率低于50%的物质被归类为"刺激物质". 肿瘤评价是对数值数据的重要补充;组织完整性、细胞形状和地层结构在显微镜下检查。

我们实验室的主要优势之一是,测试结果可以直接纳入您的监管材料中。 符合经合组织第439号技术公报的报告适用于欧盟REACH、CLP和化妆品条例。 欧盟的MDR(2017/745)、FDA 510(k)和其他医疗器械条例接受符合ISO 10993-23的报告。 此外,对于这两项标准,我们提供了全面的报告,其中包括化学特征数据、提取细节、细胞可行性结果和形态观测。

常见问题

我们收到的关于经合组织TG 439和ISO 10993-23的最常见问题之一是哪一种产品的标准是适当的。 经合组织TG 439适用于化学物质、混合物、化妆品和清洁产品。 另一方面,ISO 10993-23是专门为医疗器械和生物材料而开发的. 选择取决于您的产品管理类别;我们的实验室将评估您的产品特性并提出最合适的标准。

体外活动 测试结果经常被问及是否可以替换 阴道 测试。 是的,在许多情况下,他们可以。 经合组织TG 439和ISO 10993-23允许不必进行分类 阴道 测试,但需使用经过验证的RhE模型。 但是,如果试验结果没有结果,该物质不溶于水,或管理当局特别要求, 阴道 可能需要验证。

还有一个兴趣是,哪些是RhE模型的商业品牌,哪些应该更受欢迎。 EpiSkinTM,EpiDermTM,SkinEthicTM RHE,和LabCyte EPI-MODEL24是经合组织认证和被国际认可的RhE模型. 模型的选择取决于试验物质的特性和实验室的验证状况;所有模型都以相近的原则运作,并提供可比较的结果.

关于测试时间,RhE测试一般在1至2周内产生结果;包括报告和质量保证审查在内的总时间为3至4周。 如果在阴道 需要验证,这一期限可延长至4至6周。 最后,问题是这些测试可用于何种监管提交材料。 经合组织TG 439报告适用于欧盟REACH、CLP、化妆品条例和GHS分类;ISO 10993-23报告适用于欧盟MDR、FDA 510(k)和其他医疗器械条例。

皮肤刺激评估的体外方法构成了将科学准确性与伦理责任相结合的现代方法的基础. 我们的测试完全符合OECD TG 439和ISO 10993-23标准,我们按照最高科学标准来评价你的产品的皮肤安全性—不需要动物测试。 我们的GLP和GMP认证实验室,配备了经过验证的RhE模型和一个经验丰富的团队,是您对皮肤刺激测试需求的可靠合作伙伴. 为了展示您的产品皮肤安全,请联系我们。