النهج الحالي لتقييم التحسيس الجلدي: إرشادات OECD TG 406 وTG 429 وISO 10993-10:2021
إن التهاب الجلدي المسبب للحساسية هو رد فعل حساسية فائقة من النوع المأجور الذي يتطور استجابة للمواد الكيميائية والأجهزة الطبية. ويعد تحديد قدرة المادة على التسبب في توعية الجلد (الطاقة) خطوة حاسمة في تقييم سلامة المواد الكيميائية، والمكونات التجميلية، ومبيدات الآفات، ومنتجات المبيدات الأحيائية، والأجهزة الطبية. ويختلف الحساسية عن أنواع أخرى من السمية المحلية بسبب علاقات الاستجابة للجرعة والذاكرة المناعية؛ وقد يطور الشخص الذي أصبح محسَّناً رد فعل شديد حتى بعد إعادة التعرض لتركيزات منخفضة جداً. ولذلك، فإن اختيار طريقة الاختبار المناسبة له أهمية حيوية بالنسبة للامتثال التنظيمي وسلامة المستعملين على السواء. يلتزم مختبرنا بالمعايير الدولية الأساسية الثلاثة في هذا المجال — OECD TG 406 (GPMT/Buehler)، OECD TG 429 (LNA)، ISO 10993-10:2021 — (ب) وفقاً لمبادئ نظام الأفضليات المعمم والبرمجيات العالمية، باستخدام أحدث النهج العلمية.
اختبارات التحسيس التقليدية داخل الكائن الحي – طريقتا GPMT وبوهلر (وفقًا للإرشادات OECD TG 406)
OECD TG 406 هو كلاسيكي in vivo (ب) المبدأ التوجيهي للاختبار المستخدم لتقييم إمكانيات التوعية الجلدية للمواد الكيميائية. ويُعرّف هذا المبدأ التوجيهي طريقين مختلفين: غينيا اختبار الحد الأقصى للمركبات و Buehler Test2 - ويستخدم كلا الأسلوبين نموذج الخنازير الغينية، ويشتمل المبدأ الأساسي على تقييم الاستجابة الحساسية من خلال تطبيق للتحدي (الاستفزاز) بعد فترة محددة بعد مرحلة الاستحداث (التحسس) مع مادة الاختبار.
GPMT وهو أسلوب شديد الحساسية يستخدم أداة " أدجوفانت " (Freund ' s Complete Adjuvant - FCA) لتعزيز النظام المناعي، مما يمكّن من كشف حتى المواد ذات القدرة المنخفضة على التوعية. ويتحقق التوجيه من خلال مزيج من الحقن داخل الجلد والتطبيق الموضوعي. اختبار البوهلرومن ناحية أخرى، لا يستخدم اختبار بوهلر مادةً مساعدةً (Adjuvant)، ولا يتطلب التحسيس إلا تطبيق المادة موضعيًا. ومن ثم، فإن سيناريوهات التعرض البشري في اختبار بوهلر تنطوي على نماذج أكثر واقعية، ولكنها تتسم بدرجة أقل من الحساسية مقارنةً باختبار GPMT. وبينما يُفضَّل اختبار بوهلر للأدوية الموضعية ومكونات مستحضرات التجميل، فإن اختبار GPMT يُعد أكثر ملاءمةً للمواد الكيميائية الصناعية ومبيدات الآفات. ويُجرى التقييم في كلا الأسلوبين من خلال تصنيف تفاعلات الجلد (الحمامى والوذمة) بعد 24 و48 ساعة من إجراء اختبار التحدي.
اختبار العقد اللمفاوية المحلية (LLNA) – نهج حديث وكمي (وفقًا لدليل OECD TG 429)
OECD TG 429 وهو بديل حديث يستخدم نموذجاً للفئران يوفر مزايا كبيرة على اختبارات خنازير غينيا في تقييم التوعية الجلدية. The Local Lymph Node Assay (LLNA) هو الأول المصادق عليه in vivo الطريقة التي تقيس المرحلة التمهيدية من التحسيس وتعبّر عن النتائج كميًا. ويتمثل المبدأ الأساسي للاختبار في التطبيق الموضعي لمادة الاختبار على جلد أذن الفأر، يليه قياس تكاثر الخلايا اللمفاوية في العقد اللمفاوية الإقليمية (الأذنية) باستخدام الثيميدين الموسوم إشعاعيًا (3H-ميثيل ثيميدين).
وفيما يلي أهم مزايا نظام " لينا " بالمقارنة بمنهجي GPMT و Buehler:
- النتيجة الكمية: يُعبَّر عن إمكانات التحسيس رقميًا من خلال حساب مؤشر التحفيز (SI).
- القيمة الأساسية: ويمكن حساب التركيز الفعال لمادة الاختبار التي تسبب 3 في المائة من المحاكاة؛ وتتيح هذه القيمة إجراء تقييم مقارن لإمكانيات التوعية.
- انخفاض عدد الحيوانات وقصر المدة: في حين يتطلب اختبار GPMT استخدام 20–30 خنزير غينيا وإجراء الاختبار على مدى 4–6 أسابيع، لا يتطلب اختبار LLNA سوى 16–20 فأرًا، ويمكن إجراؤه خلال فترة تتراوح بين أسبوع وأسبوعين.
- 3R compliance: يتوافق اختبار LLNA بشكل أفضل مع مبدئي التقليل (استخدام عدد أقل من الحيوانات) والتحسين (إجراءات أقل تدخلاً).
- التقييم الموضوعي: وبما أنه يستند إلى قياس النشاط الإشعاعي بدلاً من التصوير البصري، فإن الأحكام الذاتية تُقلل إلى أدنى حد.
توصي منظمة التعاون الاقتصادي والتنمية (OECD) حاليًا باختبار العقدة اللمفاوية الموضعية (LLNA، الإرشاد الاختباري TG 429) باعتباره الطريقة الأساسية لتقييم التحسيس الجلدي للمواد الكيميائية، بينما تضع اختبارات خنازير غينيا (TG 406) كطريقة داعمة فقط في حالات محددة يتعذر فيها تطبيق اختبار LLNA.
تقييم الحساسية الجلدية للأجهزة الطبية (وفقًا لمعيار ISO 10993-10:2021)
ISO 10993-10:2021 يُعدّ معيار ISO 10993-10 المعيار الدولي الذي يحدد اختبارات التحسيس الجلدي ضمن نطاق تقييم التوافق الحيوي للأجهزة الطبية. ويشمل هذا المعيار أساليب الاختبار التي تستخدم المستخلصات المُحضَّرة من الجهاز أو من مواد الجهاز نفسها لتقييم احتمالية تسبب الأجهزة الطبية وموادها في التحسيس الجلدي.ويُعد ISO 10993-10 معيارًا شاملًا لا يغطي اختبارات التحسيس فحسب، بل يشمل أيضًا اختبارات تهيّج الجلد؛ ومع مراجعة عام 2021، جرى تناول هذين المجالين من التقييم بالتفصيل.
ويوصى بثلاث طرق أولية لتقييم التوعية الجلدية في إطار المعيار ISO 10993-10:2021:
- غينيا اختبار الحد الأقصى للدبابات: يُفضَّل في الحالات التي تتطلب حساسية عالية، وهو مناسب بشكل خاص للزرعات الدائمة والأجهزة التي تتلامس مع الجلد لفترات طويلة.
- اختبار البوهلر (اختبار الاختراق): طريقة خالية من المواد المساعدة، تستخدم التطبيق الموضعي للتحفيز، وهي مناسبة بشكل خاص للأجهزة السطحية والمنتجات التي تتلامس مع الجلد لفترة قصيرة.
- Local Lymph Node Assay (LNA): بديل كمي باستخدام نموذج الفأر، ومقبول رسميًا للأجهزة الطبية وفقًا للمواصفة ISO 10993-10:2021.
والفرق الأهم بين المعيار ISO 10993-10:2021 والصيغ السابقة هو اعتماده نهجاً قائماً على المخاطر في اختيار طريقة الاختبار وإشارة إليه in vitro/ in chemico (ب) أساليب بديلة (مثل الأساليب التي تغطيها مجموعة التعاون التقني 442 جيم التابعة لمنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي، و442 دال، و442 هاء). وينص المعيار على أنه يمكن، في بعض الحالات، إنجاز تقييم للتوعية دون إجراء اختبارات للحيوانات، استنادا إلى بيانات الوصف الكيميائي والآداب القائمة.
ويعرض الجدول أدناه تحليلا مقارنا للمبادئ التوجيهية الرئيسية الثلاثة:
| مميز | OECD TG 406 — GPMT | OECD TG 406 — Buehler | OECD TG 429 - LLNA | ISO 10993-10:2021 |
|---|---|---|---|---|
| نظام الاختبار | خنزير غينيا (هارتلي أو دونكين - هارتلي) | خنزير غينيا (هارتلي أو دونكين - هارتلي) | Mouse (CBA/Ca or C57BL/6) | خنزير غينيا أو فأر (مع استخراج الأجهزة/الهوية) |
| استخدام أدجوفانت | Yes (Freund’s Complete Adjuvant – FCA) | لا | لا (لم يُشترط أي إدعاء) | اعتماد منهجي (نعم في GPMT، لا في بوهلر، لا في LLNA) |
| الطريق التوجيهي | الحقن الداخلي + التطبيق الموضوعي | التطبيق الموضوعي فقط (الرقعة الشاملة للمحيطات) | التطبيق الموضوعي (جلد الدم) | تطبيق مستخرج أو مادة الجهاز عن طريق مسار مناسب |
| مدة الاختبار | ٤-٦ أسابيع | ٤-٦ أسابيع | ١-٢ أسابيع | )١-٦ أسابيع( |
| عدد الحيوانات | ٢٠-٣٠ )اختبار + السيطرة( | ٢٠-٣٠ )اختبار + السيطرة( | ١٦-٢٠ )اختبار + السيطرة( | يعتمد على الطريقة )١٦-٣٠( |
| نوع النتيجة | كمية (ممتاز/ملوثة) رد فعل الجلد | كمية (ممتاز/ملوثة) رد فعل الجلد | كمي (SI - مؤشر التحفيز، وقيمة EC3) | الكمية أو الكمية (معتمدة على الميثود) |
| التقييم | 24 و 48 ساعة بعد التحدي | 24 و 48 ساعة بعد التحدي | بعد خمسة أيام من آخر تطبيق (تحليل العقد الليمف) | الاعتماد على المنهجية |
| 3R Compliance | Low-Medium | متوسط | عالية (الاقتطاع والتجديد) | متوسط الهاي (مع خيار LLNA) |
| الاستخدام التنظيمي | REACH وCLP وEPA FIFRA – المبيدات ومنتجات المبيدات الحيوية | العقاقير الأساسية، المكونات التجميلية | REACH وCLP ووكالة حماية البيئة الأمريكية (EPA) – موصى به باعتباره الطريقة الأساسية | لائحة الأجهزة الطبية في الاتحاد الأوروبي (EU MDR 2017/745)، وسلسلة معايير ISO 10993، وإجراءات FDA 510(k)، والتوافق الحيوي للأجهزة الطبية |
| الوعي | عالية (الآفات حتى الضعفاء) | أحدث (نماذج مختلفة للتعرض البشري) | عالية (مقارنة بالآلية العالمية) | الاعتماد على المنهجية |
دليل اختيار طريقة الاختبار
وسيساعدك الجدول أدناه على اختيار الاختبار المناسب لتوعية الجلد على أساس نوع المنتج والهدف التنظيمي:
| النوع/الطلب | الطريقة الموصى بها | الأساس المنطقي |
|---|---|---|
| المواد الكيميائية الصناعية ومبيدات الآفات ومنتجات المبيدات الأحيائية (بموجب REACH/CLP) | OECD TG 429 (LNA) | أسلوب منظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي الأساسي؛ بيانات كمية (EC3)، حيوانات أقل، مدة أقصر، مثالية لوكالة REACH. |
| تركيبة العقاقير الأساسية، المكونات التجميلية (لوائح غير الاتحاد الأوروبي) | OECD TG 406 (Buehler) | التطبيق الموضوعي بدون سيناريوهات أكثر واقعية للتعرض البشري. |
| المواد التي يُشتبه في أنها مُحسَّنة ضعيفة، عندما تكون هناك حاجة إلى أقصى درجة من الحساسية | OECD TG 406 (GPMT) | وأعلى قدرة للكشف بفضل استخدام مختص؛ قادر على الكشف عن حساسيات منخفضة الاحتمال. |
| الحالات التي لا يمكن فيها تطبيق نظام " لينا " (مثلاً، إذا لم يكن من الممكن وضع علامات مشعة) | OECD TG 406 (GPMT or Buehler) | في الحالات المحددة التي لا تكون فيها البدائل عن اختبار LLNA مناسبة، تُستخدم اختبارات خنازير غينيا كطريقة داعمة. |
| الجهاز الطبي - الزرع الدائم، الاتصال الجلدي الطويل الأجل | ISO 10993-10:2021 (GPMT) | وتوفر درجة عالية من الحساسية أفضل تقييم لمخاطر التوعية المحتملة التي تشكلها الأجهزة الدائمة. |
| الجهاز الطبي - الجهاز السطحي، الاتصال القصير الأجل | ISO 10993-10:2021 (Buehler or LLNA) | يُعدّ خيار التطبيق الموضعي أو اختبار LLNA الكمي كافيًا للأجهزة ذات التلامس قصير الأمد، كما يتوافق مع مبادئ الاستبدال والتقليل والتحسين (3Rs). |
| الجهاز الطبي - التوافق البيولوجي الإلزامي في إطار نزع السلاح والتسريح وإعادة الإدماج في الاتحاد الأوروبي (2017/745) | ISO 10993-10:2021 | تشير لائحة الأجهزة الطبية (MDR) إلى سلسلة معايير ISO 10993 لتقييم التوافق الحيوي للأجهزة الطبية، ويُعد اختبار التحسيس إلزاميًا لجميع الأجهزة التي تتلامس مع الجلد. |
كمي (مؤشر التحفيز SI، وقيمة EC3)
اليوم، هناك in vitro و in chemico الأساليب—استحدثت كبدائل لاختبار الحيوانات من أجل تقييم حساسية الجلد وصادقت عليها منظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي—متاح ويعرض مختبرنا هذه الأساليب البديلة كجزء من حافظة الاختبار الخاصة به:
| توجيهات منظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي | طريقة | مرحلة قياس الوعي | نظام الاختبار |
|---|---|---|---|
| TG 442C | اختبار التفاعل المباشر للببتيدات (DPRA) | الخطوة الرئيسية 1: البروتين الملزم (التكفير) | المواد الكيميائية (في الكيمياء) - البذور التركيبية |
| 442 د | KeratinoSensTM/ARE-Nrf2 Luciferase Assay | الخطوة الرئيسية 2: تنشيط كيرتينوسيتي | In vitro — human keratinocyte cell line |
| TG 442E | h-CLAT / U-SENSTM / IL-8 Luc Assay | الخطوة الرئيسية 3: تنشيط الخلايا الدرائية | In vitro — human monocyte/dendritic celllike lines |
وبما أن هذه الأساليب البديلة لا يمكن أن تقي ِّم إلا مرحلة واحدة من التوعية بنفسها، فإنها توفر أعلى درجة من الدقة عند استخدامها في إطار منظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي. النهج المحدد- بما أن اختبارات الحيوانات محظورة في الاتحاد الأوروبي، ولا سيما بالنسبة للمنتجات التجميلية، فإن هذه التجارب محظورة في الاتحاد الأوروبي. in vitro/ in chemico والأساليب هي الخيار الإلزامي الوحيد. وبتطبيق هذه البدائل الحديثة، يمكن لمختبرنا أن يقدم تقييمات توعية لمنتجات الرعاية التجميلية والشخصية دون استخدام الحيوانات.
إجراء اختبارات توعية الجلد في مختبرنا
ونجري في مختبرنا المصدق عليه من قبل GLP و GMP اختبارات لتوعية الجلد في امتثال تام للمعايير الدولية. ويقيِّم فريقنا المتمرّن من علماء السموم وعلماء الأمراض البيطرية الخواص الفيزيائية الفيزيائية للمنتجات الخاصة بك، والهيكل الكيميائي، والمتطلبات التنظيمية قبل كل دراسة للتوصية باستراتيجية الاختبار الأنسب. لدينا البنية التحتية للعلامات الإشعاعية لـ LLNA وننفذ بالكامل اختبارات GPMT و Buehler. وفيما يتعلق بالأجهزة الطبية، ووفقاً للمعيار ISO 10993-10:2021، تُجرى الاختبارات باستخدام مقتطفات معدة من جهازك امتثالاً للمعيار ISO 10993-12، وتُدمج النتائج في ملف تقييم المطابقة الأحيائية الخاص بك. علاوة على ذلك، عن طريق عرض in vitro/in chemico والبدائل التي لا تتطلب استخدام الحيوانات، نظهر الالتزام التام بمبادئ الـ 3R.
الأسئلة الشائعة
| السؤال | الإجابة |
|---|---|
| هل يُمكن للنا أن تُستبدل دائماً إختبار (جي إم تي) و(بوهلر)؟ | في معظم الحالات، نعم The OECD recommends the LLNA as the primary method and positions guinea pig tests only as a supportive for situations where the LLNA cannot be applied. غير أن بعض السلطات التنظيمية قد تشترط أن يكون هذا النوع من المنتجات محدداً. |
| أي اختبار توعية إلزامي للمنتجات التجميلية؟ | بموجب لائحة مستحضرات التجميل في الاتحاد الأوروبي (EC 1223/2009)، يُحظر حظرًا تامًا إجراء اختبارات المنتجات التجميلية ومكوناتها على الحيوانات. وبالتالي، فإن استخدام طرق بديلة غير حيوانية يُعدّ أمرًا ضروريًا لتقييم سلامة مستحضرات التجميل ومكوناتها. in vitro/in chemico والأساليب التي تغطيها مجموعة التعاون التقني التابعة لمنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي 442 جيم و 442 دال و 442 هاء، بالاقتران مع النهج المحدد، هي أساليب إلزامية. |
| ما هي الظروف التي تتطلب اختبارا لتوعية الأجهزة الطبية؟ | وفقًا لمعيار ISO 10993-1، يلزم إجراء تقييم للحساسية لجميع الأجهزة الطبية التي تلامس الجلد. ووفقًا للائحة الأجهزة الطبية في الاتحاد الأوروبي (EU MDR 2017/745)، فإن هذه البيانات مطلوبة في ملف التوافق الحيوي اعتمادًا على فئة الجهاز ومدة التلامس. |
| هل يمكن استخدام نظام LLNA تحت ISO 10993-10:2021؟ | نعم ISO 10993-10:2021 officially recognizes GPMT, Buehler, and LLNA for skin sensitization assessment. ويُفضّل نظام " لينا " ، لا سيما في الحالات التي يكون فيها الامتثال لمبادئ " 3R " أولوية. |
| كم من الوقت يستغرق للحصول على نتائج الاختبار؟ | LLNA: 3-4 أسابيع (بما في ذلك الإبلاغ). GPMT/Buehler: 6-8 أسابيع (بما في ذلك الإبلاغ). في المختبر البدائل: 2-3 أسابيع. وقد يختلف مجموع المدة حسب عبء العمل واستعراض ضمان الجودة. |
| إذا كان ينبغي تقييم المادة على أنها مادة كيميائية وكعنصر للجهاز الطبي، أي اختبار ينبغي إجراءه؟ | وبما أن السياقات التنظيمية تختلف، فإن كلا التقييمين قد يكون مطلوبا بصورة منفصلة. والاختبار وفقاً لنموذج TG 429 أو TG 406 لمنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي مناسب للتصنيف الكيميائي؛ والاختبار في إطار المعيار ISO 10993-10:2021 مناسب للمواءمة البيولوجية للجهاز الطبي. ويوفر مختبرنا حلولا متكاملة لتلبية كل من هذه الاحتياجات. |
وتوعية الجلد نقطة نهاية سمية تؤثر مباشرة على سلامة المستخدمين ولا يمكن تجاهلها. إن التحديد الدقيق لخطر ردود الفعل الحساسية باستخدام الأساليب العلمية عامل حاسم في تحديد موثوقية المنتج وقبوله في السوق. ويقوم مختبرنا بإجراء جميع اختبارات التوعية الجلدية التي تغطيها مجموعة الـ 406 التابعة لمنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي، ومجموعة الـ 429 التابعة لمنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي، والمنظمة الدولية لتوحيد المقاييس 10993-10:2021 وفقاً لمعايير نظام الأفضليات المعمم ومع التقيد التام بمبادئ الـ 3R. للعمل معنا في تخطيط أنسب استراتيجية لتقييم التوعية لمادة كيميائية أو جهازك الطبي، اتصل بنا
