皮肤敏感性评估的现行办法:经合组织TG 406、TG 429和ISO 10993-10:2021
过敏接触性皮炎是一种由免疫介导的延后型超敏反应,由化学和医疗器械反应而发展而来. 确定某种物质引起皮肤敏化(过敏)的潜力是化学品、化妆品、杀虫剂、杀生产品和医疗器械安全评估的关键步骤。 由于剂量-反应关系和免疫记忆,敏感性与其他类型的局部毒性不同;已经敏化的个人即使在再次接触非常低的浓度时也可能形成严重反应。 因此,选择适当的测试方法对遵守规章和用户安全都至关重要。 我们的实验室遵守这个领域的三项基本国际标准。 — 经合组织 TG 406 (GPMT/Buehler), (中文(简体) ). 经合组织 TG 429 (LLNA),以及 ISO 10993-10 (英语).:2021 — 采用最新的科学方法。
经合组织TG 406:传统在Vivo的敏感性测试-GPMT和Buehler方法
经合组织 TG 406 是经典 阴道 用于评估化学物质皮肤敏化潜力的测试准则。 本准则界定了两种不同的方法: 几内亚猪的最大化试验 和 Buehler 测试两种方法都使用豚鼠模型,其基本原则是,在试验物质的诱导(敏化)阶段结束后的一段时间内,通过挑战(刺激)应用评估过敏反应。
全球采购管理小组 这是一种高度敏感的方法,它使用辅因子(Freund's Complete Adjuvant – FCA)来增强免疫系统,从而能够检测出即使是敏感潜力低的物质。 上岗教育通过皮肤内注射和局部应用相结合来实现. 布埃勒测试另一方面,不使用附加物;上岗培训完全通过专题应用进行。 因此,Buehler测试模型的人类接触情景更为现实,但与GPMT相比敏感度较低。 虽然Buehler测试更适合用于局部药物和化妆品成分,但GPMT更适合工业化学品和农药. 在两种方法中,在挑战发生后24和48小时,通过皮肤反应(红外和水肿)的分级进行评估。
经合组织 TG 429: 地方淋巴节点分析(LLNA)-现代和定量方法
经合组织 TG 429 是一种现代替代品,使用鼠标模型,在评估皮肤敏化度时比豚鼠试验具有显著优势。 地方淋巴结( LLNA) 是第一个验证的 阴道 方法,衡量宣传的入门阶段,并量化地表达成果。 试验的基本原则涉及试验物质对老鼠耳皮的局部应用,然后用有放射性标签的胸腺炎(3H-甲基胸腺炎)测量区域(尿道)淋巴结的淋巴细胞扩散.
与GPMT和Buehler方法相比,LLNA的最大优势如下:
- 量化结果: 通过计算刺激指数(SI)以数字表示宣传潜力。
- EC3 值 : 可以计算造成3%刺激的试验物质的有效浓度;这一数值可以对敏化潜力进行比较评估。
- 动物较少,时间较短: GPMT需要20-30只豚鼠和4-6周,而LLNA只需要16-20只小鼠和1-2周.
- 3R合规: LLNA更符合减少(食虫动物)和完善(减少入侵程序)的原则。
- 目标评价: 由于它是基于放射性测量而不是视觉分数,主观判断被最小化.
经合组织目前建议将LLNA(TG 429)作为评估对化学物质的皮肤敏化度的主要方法;它将豚鼠试验(TG 406)作为备用方法,仅用于无法应用LLNA的特定情况。
ISO 10993-10:2021: 医疗器械皮肤敏感性评价
ISO 10993-10:2021 (英语). 在医疗器械的生物兼容性评估范围内界定皮肤敏化试验的国际标准。 该标准包括使用从设备或设备材料本身得到的提取物来评价医疗器械和生物材料造成过敏接触皮肤炎的可能性的试验方法. ISO 10993-10是一个综合标准,不仅包括了敏化测试,还包括皮肤刺激测试;随着2021年的修订,这两个评价领域得到了详细的处理.
根据ISO 10993-10:2021,建议采用三种主要方法进行皮肤敏化评估:
- 几内亚猪最大化试验(GPMT): 在需要高度敏感的情况下更受欢迎;特别适合长期皮肤接触的永久性植入和装置。
- Buehler测试( 已关闭的补丁测试) : 一种无附带材料的方法,利用专题应用来进行诱导;特别适合于表面装置和有短期接触的产品。
- 本地淋巴结( LLNA) : 使用鼠标模型的定量替代品;根据ISO 10993-10:2021,医疗器械被正式接受.
ISO 10993-10:2021与以前的版本之间最显著的区别是采用了基于风险的测试方法选择方法,并提到了 试管/ 在化学中 替代方法(例如经合组织TG 442C、TG 442D和TG 442E所涵盖的方法)。 该标准规定,在某些情况下,可以根据化学特征数据和现有文献,不进行动物检测,即可完成敏化评估.
下表对三个主要准则进行了比较分析:
| 特征 | 经合组织TG 406 — GPMT | 经合组织 TG 406 – Buehler | 经合组织 TG 429 – LLNA | ISO 10993-10:2021 (英语). |
|---|---|---|---|---|
| 测试系统 | 几内亚猪(Hartley或Dunkin-Hartley) | 几内亚猪(Hartley或Dunkin-Hartley) | 鼠标(CBA/Ca或C57BL/6) | 几内亚猪或老鼠(带有设备提取物/材料) |
| Adjuvant 的使用 | 是(Freund的完整辩护词 – FCA) | 否 | 否(不需要辅音) | 方法依赖(GPMT是,Buehler是,LLNA是) |
| 上岗路线 | 贸易热注射+专题应用 | 仅专题应用( 专有补丁) | 专题应用(皮肤) | 通过适当途径应用设备提取物或材料 |
| 测试期限 | 4至6个星期 | 4至6个星期 | 1至2个星期 | 取决于方法(1至6周) |
| 动物数量 | 20-30 (测试+控制) | 20-30 (测试+控制) | 16-20 (测试+控制) | 取决于方法(16-30) |
| 结果类型 | 定性(正/负),皮肤反应分数 | 定性(正/负),皮肤反应分数 | 数量(SI-刺激指数,EC3值) | 定性或定量(方法依赖) |
| 评价时间 | 挑战后24和48小时 | 挑战后24和48小时 | 上一次应用5天后(淋巴结分析) | 方法依赖 |
| 3R 遵守情况 | 中度 | 中 | 高(减少和完善) | 中高 (带有 LLNA 选项) |
| 规范使用 | REACH、CLP、EPA FIFRA、农药和杀生产品 | 主题药物、化妆品 | EPA建议的主要方法 | 欧盟MDR(2017/745),ISO 10993-1,FDA 510(k),医疗器械生物相容性 |
| 敏感性 | 高 (探测器甚至弱敏化器) | 中度(更好的人类接触模型) | 高(与GPMT相仿) | 方法依赖 |
测试方法选择指南
下表将帮助您根据产品类型和监管目标选择适当的皮肤敏化测试:
| 产品类型/要求 | 建议的方法 | 理由 |
|---|---|---|
| 工业化学品、农药、生物杀灭产品(REACH/CLP) | 经合组织 TG 429 (LLNA) | 经合组织主要方法;定量数据(EC3),动物较少,持续时间更短,为REACH理想. |
| 专题药物制剂、化妆品(非欧盟条例) | 经合组织 TG 406 (Buehler) | 在无附带物的情况下进行专题应用,更现实地模拟人类接触情况。 |
| 在需要最大敏感性时怀疑为弱敏物质 | 经合组织TG 406 (GPMT) | 由于使用了相接剂,检测能力最高;能够检测出低潜力的敏化物。 |
| 无法适用LLNA的情况(例如,如果无法进行放射性标签) | 经合组织TG 406(GPMT或Buehler) | 在不适宜LLNA替代品的特定情况下,豚鼠检测作为一种备份方法. |
| 医疗设备 -- -- 永久植入、长期皮肤接触 | ISO 10993-10:2021 (GPMT) (英语). | 高灵敏度是对永久装置可能造成的灵敏风险的最佳评估。 |
| 医疗装置 -- -- 表面装置,短期接触 | ISO 10993-10:2021 (Buehler或LLNA) (英语). | 专题应用或定量LLNA选项对于有短期接触的设备来说是足够的,符合3R. |
| 医疗设备-欧盟MDR规定的强制性生物相容性(2017/745) | ISO 10993-10:2021 (英语). | 磁共振参照ISO 10993系列对医疗器械进行生物相容性评估;所有接触皮肤的器械都必须进行敏化测试。 |
现代替代品:维特罗和化学方法
今天,这里有 试管 和 在化学中 方法—作为动物试验的替代品,用于皮肤敏化评估,并经经合组织验证—可用。 我们的实验室提供这些替代方法作为其测试组合的一部分:
| 经合组织指南 | 方法 | 宣传阶段 | 测试系统 |
|---|---|---|---|
| TG 442C型电力机车 | 直接活性分析(DPRA) | 关键步骤1:蛋白质绑定(哈普特克) | 化学(以化学为单位)-合成多肽 |
| TG 442D 电话 | KeratinoSensTM / ARE-Nrf2 路西法尔塞分析 | 关键步骤2:Keratino细胞活化 | 体外 – 人白细胞细胞线 |
| TG 442E 电话 | h-CLAT / U-SENSTM / IL-8 吕克·阿萨伊 | 关键步骤3:牙科细胞活化 | 体外-人单细胞/腺细胞类细胞线 |
由于这些替代方法只能单独评估单一的敏化阶段,因此,如果在经合组织框架内结合使用,它们就能提供最高的准确性。 界定的方法(DA)由于欧盟禁止动物检测,特别是化妆品检测, 试管/ 在化学中 方法是唯一的强制性选择。 通过应用这些现代替代品,我们的实验室能够对化妆品和个人护理产品进行完全不使用动物的敏感性评估。
在我国实验室进行皮肤敏感性测试
在我们的GLP和GMP认证实验室,我们完全按照国际标准进行皮肤敏化测试。 我们经验丰富的毒理学家和兽医病理学家团队在每次研究前都会评价你产品物理化学特性、化学结构以及监管要求,以推荐最合适的测试策略。 我们有LLNA的放射性标签基础设施,并全面实施GPMT和Buehler测试. 对于医疗器械,根据ISO 10993-10:2021,测试使用按照ISO 10993-12从设备中制取的提取物进行,测试结果被纳入了你的生物相容性评估档案. 此外,通过提供 试管/在化学中 我们表现出对3R原则的最大承诺。
常见问题
| 问题 | 回答 |
|---|---|
| LLNA能永远取代GPMT和Buehler测试吗? | 在大多数情况下,是的。 经合组织建议将LLNA作为主要方法,并将豚鼠试验定位为仅作为无法应用LLNA的后备。 然而,一些监管部门可能要求特定产品种类的GPMT. |
| 化妆品必须进行何种宣传测试? | 根据欧盟化妆品条例(EC 1223/2009),完全禁止对化妆品及其成份进行动物检测. 因此,使用 试管/在化学中 经合组织第442C号、第442D号和第442E号技术指南与定义方法一起涵盖的方法是强制性的。 |
| 医疗器械在什么情况下需要进行敏化测试? | 根据ISO 10993-1,需要对所有接触皮肤的医疗器械进行敏化评估. 根据欧盟MDR(2017/745),生物相容性档案需要这些数据,取决于设备的类别和接触时间。 |
| LLNA能在ISO 10993-10:2021下被使用? | 对 ISO 10993-10:2021正式承认GPMT,Buehler,和LLNA进行皮肤敏化评估. 特别在遵守3R原则为优先事项的情况下,LLNA更受青睐. |
| 要多久才能得到测试结果? | LLNA:3-4周(包括报告)。 GPMT/Buehler:6-8周(包括报告)。 体外活动 替代品:2至3周。 总期限视工作量和质量保证审查而定。 |
| 如果要将某一物质作为化学品和医疗器械的组成部分加以评价,则应进行何种试验? | 由于监管背景不同,可能要求进行两种评价。 按照OECD TG 429或TG 406进行的测试适用于化学分类;根据ISO 10993-10:2021进行的测试适用于医疗器械的生物相容性. 我们的实验室为满足这两种需要提供了综合解决办法。 |
皮肤敏化是直接影响用户安全的毒理学端点,不容忽视. 准确确定使用科学方法进行过敏反应的风险,是确定产品可靠性和市场接受度的关键因素。 我们的实验室按照GLP标准并尽可能遵守3R原则,进行经合组织TG 406、经合组织TG 429和ISO 10993-10:2021涵盖的所有皮肤敏化测试。 与我们合作,为您的化学物质或医疗器械规划最适当的敏感度评估策略,请联系我们.
