兔子真菌试验之外:科学引导的向单体活化试验过渡
NanoTox关于基于风险的、无动物的热能测试未来的立场文件
执行摘要
皮洛根检测位于患者安全,科学严谨和动物福利的交叉点. 一个多世纪以来 兔真菌试验(RPT) 扎根这个学科。 该时代在欧洲现已结束:欧洲药典从文本中删去了《欧洲专利法》(执行) 2025年7月1日 (英语).)并压制了专门章节 2.6.8 Py 从 2026年1月1日 (中文(简体) ).在新的一般性章节中,以基于风险的框架取代规范性测试 5.1.13 发热性.
NanoTox的立场是刻意和毫不含糊的: 不鼓励常规 RTT 。 在科学上适当、技术上可行和可以接受的情况下,独活性活性测试(MAT, Ph. 2.6.30)是首选方法。 因此,NanoTox正在规划有条不紊地实施MAT能力,作为其测试组合持续发展的一部分 — 在质量框架内,至少与它取代的动物方法一样有力。
本文件阐述了这一方向的科学和管理基础、正确的决策等级以及负责任的收养要求。
为什么Pyrogen测试问题
皮洛根斯(Pyrogens)是能引发发烧和系统炎症反应的物质,会经过亲缘管理或接触某些医疗器械. 其化学性质多样,来源不止一个:
类 | 具有代表性的花生 | 起始 |
|---|---|---|
内分泌毒素 | 利波列沙克夏尔德(LPS) | 格氏阴性细菌外膜 |
非内分泌的多肽 | 利波提伊乔克酸、活性糖、β-葡萄糖、病毒成分、未甲基化CpGDNA、某些微粒和化学品 | 成克阳性细菌、真菌/真菌、病毒、环境和材料介质来源 |
关键科学观点是 并非所有的多肽都是内分泌常规 细菌内毒素试验(BET) — 无论是基于LAL(ph. Eur.2.6.14),还是重组因子C(rFC,2.6.32) — 主要处理与内分泌有关的风险,不一定涵盖全部无核试剂。
条例含义: 选择一种多肽测试策略必须遵循 科学合理的风险评估,而不是假设任何单一方法普遍足够。
为什么兔皮质测试是退休
几十年来,该研究所对药品安全作出了实质性贡献。 然而,它是一种以动物为主的生物实验,受使用另一物种作为试验系统的固有可变性的影响,它对内分泌毒素的敏感性明显低于BET或MAT。
现代管理科学越来越优先考虑以下方法:
- 与人类机械相关;
- 可再生并经过充分验证;
- 能够探测出相关危险;
- 适合特定产品矩阵;
- 与当代质量系统相兼容;
- 与 3Rs (3Rs) (3Rs) (3Rs) (3Rs) — 更换、减少和完善。
欧洲监管转变(有效时间表)
里程碑 | 日期 | 来源 |
|---|---|---|
欧大理事会关于在内部取代预防酷刑的决定 ~5岁 | 2021年6月 (中文(简体) ). | EDQM 主题 |
发表热致性战略文件 | 2022年9月 (中文(简体) ). | 费默罗帕 |
欧大理事会通过57个订正案文,删除 " 预防酷刑 " +新的第5.1.13章(第179届会议) | 2024年6月 (中文(简体) ). | EDQM 主题 |
订正案文(补编11.8)改为适用 | 2025年7月1日 (英语). | EDQM / EMA 数据 |
第2.6.8节 Py 从Eur. Ph. | 2026年1月1日 (中文(简体) ). | EDQM 主题 |
rFC正式并入2.6.14(问题13.1) | 2026 | EDQM 主题 |
关于范围的说明: EDQM 描述删除 RPT 从 57个订正案文 第179届会议通过的《公约》 ~60个文本,包括一般章节、剂量表和个别专著)。 NanoTox使用57文本数字作为主要,EDQM可验证的参考.
因此,指导性问题已经改变。 已经不是了 "应该进行兔子测试?" 不过 "在科学上适当的体外策略是什么来控制高温风险 这一特定产品?”
MAT:与人有关的做法
这 单体活化测试 利用人类单细胞或单细胞系统来检测能够激活人类先天免疫反应的物质. 单细胞在接触多肽时释放出煽动性介质(如IL-1β、IL-6、TNF-α等);它们的量化提供了一种 虚拟 读出多发性活性。
主要科学优势:
- 二. 人类相关性 — 反应是由人类先天免疫系统产生的,而不是从代孕物种中推断出来的。
- 广泛检测 — MAT原则上可以探测 二恶英和无内分泌二恶英把它和BET区分开来
- 可复制性 — 灵敏度较高,化验间可变性也比RTT低.
MAT 编译为 普通博士 第2.6.30章,专门有一章论述内在发热疫苗(2.6.40EDQM将它确定为一种推荐方法,用于广泛多肽检测。
新出现的证据与经证实的证据
科学基础不断加强. 最近经过同行审议的两项贡献与面向全球监测方案的实验室有关:
- 丹尼尔斯·R,范德埃尔斯特·W,So CK等. 适合目的测试和单细胞活化测试的独立GMP验证. Curr Res Textool. (原始内容存档于2018-09-29). 2025;8:100206. doi:10.1016/j.crtox. 2024.141.00206 (英语). — 在当代质量环境中展示产品特有的GMP级验证.
- Burgmaier L, van den Berg J, Gajewi M等译. 鉴定单体活化试验示范等效于兔皮原试验. (原始内容存档于2018-09-21). Int J Mol Sci. 2025;26(22):11136. doi:10.3390/ijms262211136 (英语: — 报告MAT-RPT等同的验证证据。
经验证的 v. 新兴 : MAT作为比较方法的地位(2.6.30)是: 经验证的监管知识在所有矩阵中都存在通用血压-等同性的说法 产品和具体情况 并需要逐个演示 — 它们还不是笼统的监管主张。
MAT不是"一个方法适合每个产品"
向MAT过渡不应意味着在没有评价的情况下用一个规范测试取代另一个规范测试。 在将MAT应用于某一产品之前,实验室必须处理:
- 产品特定干扰和细胞毒性;
- 试验敏感性和适用的探测限度;
- 相对内分泌毒素与核浓缩厂风险;
- 选定细胞系统的适宜性(集合捐献细胞、细胞线、全血);
- 积极的和消极的控制是否充分;
- 假设精确性和可复制性;
- 特定产品的验证/核查(干扰测试、悬崖回收和 — 设备 — 直接单细胞接触;
- 适用的药品和监管预期。
MAT的执行本身必须具有科学的严格性并得到适当的验证。 对于面向GLP/GMP的实验室,原理是不可谈判的: 取代动物试验绝不能减少科学控制;它必须在同样强有力的质量框架下采用科学合理的方法。
正确的决定等级是以风险为基础的
在5.1.13框架内, 数量 用于广泛检测发热物,同时 选取 如果风险评估将细菌内分泌作为相关问题予以支持,则可能适宜。 如果选择BET单独解决高温性问题,则必须通过基于风险的办法作出该决定。 5.1.1.3号博士.
因此,科学上适当的等级 不 简单 RPT — MAT 数据它是:
害虫风险评估
↓
适当的虚拟方法选择(MAT和/或BET)
↓
产品特定适用性/验证
↓
Regulatory Justification & Dossier Alignment
就欧盟的营销授权而言,更换方法会产生具体的变异后果:采用药物化的BET方法(2.6.14/2.6.32)一般作为一种处理。 类型 IB 采用药用MAT(2.6.30)或非药用 虚拟 方法一般为 第二类 变异(每EMA QQA). 营销授权持有者应删除档案中的RTT并相应评估替换需要。
国际图片不完全统一
欧洲已果断地前进;全球格局尚未趋同。
- 美国: 这 2026年3月 第2版 (中文(简体) ). / Pyrogen和内分泌毒素测试:问答 (已印发) 2026年3月18日 (中文(简体) ).* 参照订正案文更新林业发展局目前的想法 统一计划 <85>, <161> 和 AAMI ST72 (英语).,撤销已过时的1987年《法律援助法》指南,并证实,如果替代办法符合适用的法规和规章要求,则可采用替代办法。 但是,它没有禁止《刑事诉讼法》,也没有(在当时的评论中)明确纳入《统一私法》。 <86> 重新组合方法纳入林业发展局确认的标准。
- 医疗设备(美国): 林业发展局的协商一致标准清单继续参考了遗留的多肽/多毒素方法(例如: <151> (原始内容存档于2018-10-21) (Pyrogen Test) (英语).
- 卫生组织: 2025年生物产品质量控制动物试验的替换或去除指导包括一个支持非动物方法的专用多酚分会 — 加强全球旅行方向。
精确的监管框架: 这将是 不准确 声明全世界普遍禁止《刑事诉讼法》。 防守立场是:
如果经过充分验证、科学上合适和监管上可接受的非动物方法能够应对相关的多核素风险,则再也不能将这种常规、首选方法。
NanoTox的计划方向
NanoTox支持逐步采用科学合理的动物测试替代品. 我们的先发法是建立在:
- MAT作为首选的广泛的多肽检测方法酌情;
- (单位:千美元) 结构化执行方案 涵盖方法选择、实验室能力、人员培训、标准业务方案开发、资格/认证、产品特定适用性评估和质量系统整合;
- BET(包括rFC). 部署在风险评估确定内分泌是主要关注事项的地方;
- 保留 只有在具体的科学、产品、药品或监管要求要求时 — 有文件证明的理由。
这既反映了科学进步,也反映了3R的负责任应用.
- 前进
热能评估的未来 不仅仅是去除动物试验 — 这是向着 更好,更与人类相关的科学成功过渡需要经过验证的方法、适当的控制、有科学依据的风险评估、目前的监管理解以及对每种产品特点的认真关注。
管理上对MAT的接受程度不断提高,表明它与人类的关系如何。 虚拟 方法正在进入医药和医药产品安全评估的主流。
在NanoTox,目标不仅仅是要取代REPT,而是要建立科学可靠、经验证和监管一致的热能测试方法。 — 酌情将MAT定位为首选方向。
参考资料
- EDQM (英语). 尤尔博士在专著中向兔皮核糖核酸测试提出告别. 2024. (57个修订案文+第5.1.1.3章,2024年6月第179届《欧洲公约》缔约方会议;补编第11.8号,适用2025年7月1日。 )
- EDQM (英语). 一般性动物安全测试天鹅之歌 / P基测试 2.0. 2025–2026. (第2.6.8章压制了2026年1月1日).
- 欧洲药典. 总则 5.1.1.3 — 发相相.
- 欧洲药典. 总则 2.6.30 — 单体活性测试 (内在发热疫苗2.6.40)。
- 埃马。 药品质量:问答 — 第1编 (RPT删除;方法替换的变异类别). 2026 (英语).
- 卫生组织。 生物产品质量控制动物试验替代或去除指南. (原始内容存档于2018-10-12). WHO EBAS, 2025.
- 丹尼尔斯·R,范德埃尔斯特·W,So CK等. 适合目的测试和单细胞活化测试的独立GMP验证. Curr Res Textol. 2025;8:100206 (中文(简体) ). doi:10.1016/j.crtox. 2024.141.00206 (英语).
- Burgmaier L, van den Berg J, Gajewi M等译. 鉴定单体活化试验示范等效于兔皮原试验. Int J Mol Sci. 2025; 26(22):11136 (英语). doi:10.3390/ijms262211136 (英语).
- 美国FDA. Pyrogen和内分泌毒素测试:问答 — 第2版. 2026年3月18日发行. (参考USP) <85>, <161>; AAMI ST72; 撤销1987 LAL指导. )
- ISO/TR 2158:2021 (英语). 发火性 — 医疗器械多酚检测的原则和方法。
